[发明专利]PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用

说明书

本发明公开了一种可以鉴别PCV3 Cap单克隆抗体的PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用，包括两条多肽，其氨基酸序列分别为：PCV3 Cap 47‑62:NVISVGTPQNNKPWHA；PCV3 Cap 136‑149:TSKKKHSRYFTPKP；旨在对PCV3 Cap蛋白抗原表位研究提供可靠依据。本发明采用ELISA的方法，利用PCV3 Cap单克隆抗体筛选PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位，含所述短肽的氨基酸序列。将所述的PCV3 Cap蛋白抗原表位在制备预防和/或治疗PCV3抗体中应用。本发明优点在于筛选出两条PCV3 Cap蛋白新抗原表位的多肽序列，完成了表位的鉴定，为PCV3表位疫苗和相关诊断试剂的研究打下基础，对PCV3检测和鉴别诊断提供有效的检测手段。

技术领域

本发明属于细胞免疫学技术领域，具体涉及一种可以鉴别PCV3 Cap单克隆抗体的PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽及其筛选与应用。

背景技术

猪圆环病毒(Porcine circoviruses, PCV)是目前对世界养猪业危害最为严重的疾病之一。目前，该病毒包括三种不同的类型：猪圆环病毒1型(Porcine circoviruses 1,PCV1)、猪圆环病毒2型(Porcine circoviruses 2, PCV2)和猪圆环病毒3型(Porcinecircoviruses 3, PCV3)。其中PCV1被证实无致病性；PCV2具有较强的致病性，常引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）；PCV3作为一种新型圆环病毒自2016年在美国首次报道以来，先后在中国、韩国、泰国等亚洲地区及波兰、意大利、德国等欧洲地区多个国家均有报道，该病原已在世界范围内流行，并且常与 PCV2 混合感染，加重了疾病的症状，增加了疫病的防控难度，加大了养猪业的经济损失。

抗原表位（epitope）是病毒结构蛋白的重要元件，其蛋白分子量较小且常被机体的淋巴细胞所识别，因此被称为抗原决定簇，通常由5～17个氨基酸残基组成，在诱导和细胞介导的病毒免疫反应中发挥重要作用。根据其受体不同，表位分为B细胞表位和T细胞表位；其结构不同，表位又分为线性表位和构象表位。抗原表位的研究对于完善病毒蛋白结构及病毒与宿主作用关系的研究意义重大，同时对病毒的检测，表位疫苗的制备提供材料基础应用价值巨大。

由于PCV3属于最近新发现的病毒株，临床上还没有效的防控手段。病毒在进化过程中，其本身为了逃逸机体的免疫监视，势必会进行相关氨基酸位点的突变，或者发生基因片段的重组，从而使得其在宿主内增殖。不论是关键氨基酸位点的突变还是基因片段的重组，其本质是病毒抗原表位的变异，其抗原表位不仅可以制备相应的检测试剂，还可以制备相关的亚单位疫苗，甚至根据其抗原表位制备相应的治疗抗体。

近年的研究表明，根据病毒的表位从而研发相应的诊断试剂，治疗抗体，新型的亚单位疫苗是可行的。然而如何获得合适的疫苗靶抗原及其表位，研制新型PCV3表位疫苗或药物是如今本领域技术人员所努力解决的技术难题。

发明内容

本发明的目的是提供PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位多肽序列的筛选方法，通过生物信息学技术和免疫学方法预测及鉴定出PCV3 Cap蛋白的抗原表位，同时公开PCV3Cap蛋白抗原表位的用途，以解决对PCV3 Cap蛋白细胞表位研究不足的技术问题。

本发明PCV3 Cap蛋白B细胞线性抗原表位的多肽序列，包括两条多肽，其氨基酸序列分别为：

PCV3 Cap 47-62：NVISVGTPQNNKPWHA；

PCV3 Cap 136-149：TSKKKHSRYFTPKP；

上述氨基酸的核苷酸序列分别为：

PCV3 Cap 47-62： aacgtcattt ccgttggaac ccctcagaat aacaagccct ggcacgcc 48；