[发明专利]一种水稻生长素输出蛋白OsPIN1b抗体的制备方法及其应用

说明书

一种水稻生长素输出蛋白OsPIN1b抗体的制备方法，包括如下步骤：通过生物信息学方法分析水稻生长素输出蛋白OsPIN1b，从OsPIN1b氨基酸序列中选取一段序列为QSSRNPTPRGSSFNC的多肽序列，按照多肽序列合成多肽，再将多肽与载体偶联后得到多肽抗原，将多肽抗原注射入新西兰白兔，初次免疫后，进行3次加强免疫，经血清分离纯化获得水稻生长素输出蛋白OsPIN1b多克隆抗体。本方法制备的多克隆抗体能够通过免疫印迹技术特异性识别水稻中生长素输出蛋白OsPIN1b，为揭示植物生长素输出载体蛋白PIN家族调控生长素的极性运输与植物发育机制提供理论基础，在生长素输出蛋白PIN1的检测和功能鉴定中具有广泛用途。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种水稻生长素输出蛋白OsPIN1b抗体的制备方法及其应用。

背景技术

生长素是最早被发现的一种植物激素,极性运输的特性是其区别于多种植物激素的独有特征。目前，人们普遍认为生长素输入输出载体在细胞质膜上的不均匀分布实现了生长素的极性运输，并建立了生长素在植物体内的梯度分布。生长素的极性运输参与了植物许多重要的生长发育过程,其中包括植物的分枝、向性生长和根系的生长发育等。生长素及其极性运输不仅影响植物的形态特征，而且和矿质元素的吸收、运输和分布之间存在着密切的联系。

PIN蛋白家族是目前研究较多的生长素输出载体，PIN蛋白是一种跨膜蛋白，它在细胞膜上的极性定位决定了生长素的空间分布。在拟南芥中，一共从PIN基因家族中克隆到了8个基因；水稻中预测到12个PIN的同源基因。OsPIN1在根原基和维管组织中表达，沉默OsPIN1的转基因植株中，不定根的发生和发育受到抑制，说明OsPIN1在依赖生长素的不定根发生过程中起着重要作用。本发明为检测水稻生长素输出蛋白OsPIN1b在细胞膜中的定位、分布及细胞胞吞，研究制备了一种水稻生长素输出蛋白OsPIN1b的多克隆抗体，为进一步开展及分析水稻生长素输出蛋白OsPIN1b功能奠定基础。

目前，已克隆获得水稻生长素输出载体基因OsPIN1b并成功转化了多种水稻品种，其在水稻根尖中高表达；通过调节水稻根尖组织活性，影响生长素的运输及根原基的伸长。有研究推测OsPIN1b基因可能参与水稻根的向地性。

制备水稻生长素输出载体OsPIN1b抗体，有利于进一步通过免疫组化、免疫印迹等方法观察水稻及其它植物中生长素输出蛋白OsPIN1b的细胞膜定位，揭示生长素极性运输调控植物生长发育的作用机制，进一步阐明植物激素相互作用与植物发育的内在联系，从而利用生长素调控植物生长发育奠定实验基础。

本发明首次公开了水稻生长素输出蛋白OsPIN1b的抗体的制备方法以及该抗体的免疫组化应用。

发明内容

本发明的目的在于填补水稻生长素输出蛋白OsPIN1b检测领域的空白，提供了一种针对水稻生长素输出蛋白OsPIN1b的多克隆抗体的制备方法。

本发明所要解决的问题是提供一种水稻生长素输出蛋白OsPIN1b的多克隆抗体的制备方法，本发明采用以下技术方案：

一种水稻生长素输出蛋白OsPIN1b的多克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：

1)通过生物信息学分析水稻Oryza sativa subsp.japonica(Nipponbare)基因OsPIN1b(LOC_Os02g50960 or Os02g0743400)表达的蛋白OsPIN1b。

2)从抗体编码蛋白OsPIN1b中选取一段多肽序列QSSRNPTPRGSSFNC，具体方法为：根据肽链结构复杂程度,易氧化程度、合成难度、氨基酸类别和分布等,最终确定抗体编码蛋白第244-258位15个氨基酸作为合成多肽的氨基酸序列,其中第258位氨基酸由H→C,序列为QSSRNPTPRGSSFNC。

3)按照步骤2中的多肽序列合成多肽；

4)将多肽与载体偶联后得到多肽抗原；