[发明专利]检测人TERT启动子突变的引物和探针、试剂盒和装置

权利要求书

1.一种用于检测人TERT启动子突变的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有TERT C228T ddPCR反应液和TERT C250T ddPCR反应液；

所述TERT C228T ddPCR反应液中含有用于检测TERT 228号密码子突变的引物和探针：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的下游引物，由SEQ ID NO:3所示的野生型探针和SEQ ID NO:4所示的突变型探针；

所述TERT C250T ddPCR反应液中含有用于检测TERT 250号密码子突变的引物和探针：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的下游引物，由SEQ ID NO:5所示的野生型探针和SEQ ID NO:6所示的突变型探针。

2.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述探针均带有荧光基团和淬灭基团，所述野生型探针与所述突变型探针的荧光基团不同；

优选地，所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、Cy5和Cy3，所述淬灭基团选自MGB、BQH1、TAMARA和BHQ2；

进一步优选的，所述野生型探针的荧光基团选自VIC，所述野生型探针的淬灭基团选自MGB，所述突变型探针的荧光基团选自FAM、所述突变型探针的淬灭基团选自MGB。

3.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，引物和探针的浓度为0.1～5μM，优选的，引物的浓度为1.8μM，探针的浓度为0.4μM。

4.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有ddPCRMIX3，所述ddPCR MIX3中的主要成分包括dNTPs、KCl、Tris-HCl、MgCl₂、DTT和Taq酶。

5.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有对照品，所述对照品包括阴性对照和阳性对照，所述阴性对照的主要成分为工艺用水，所述阳性对照的主要成分为由SEQ ID NO:7～SEQ ID NO:9所示的质粒混合液。

6.根据权利要求1所述的微滴PCR试剂盒，其特征在于，所述微滴PCR试剂盒的待测样本选自石蜡包埋组织切片、穿刺组织、胸水、全血、外周血、口腔黏膜、胸腔积液、血浆和血清。

7.一种检测基因突变的装置，其特征在于，所述装置包括PCR混合液制备单元、数字PCR反应单元和信息处理单元；

所述PCR混合液制备单元用于将待测DNA模板与ddPCR反应液混合，制备得到ddPCR混合液；

所述ddPCR反应液包括如权利要求1所述的TERT C228T ddPCR反应液和TERT C250TddPCR反应液。

8.根据权利要求7所述的装置，其特征在于，所述数字PCR反应单元配置用于将所述PCR混合液制作PCR微反应液滴，再进行PCR扩增反应。

9.根据权利要求8所述的装置，其特征在于，所述PCR扩增反应的反应条件为：93～96℃预变性8～15分钟；93～96℃变性5～50秒，56～60℃延伸30-90秒，共进行30～40个循环，97～99℃保温8～10min，2～5℃终止反应；

优选地，所述PCR扩增反应的反应条件为：95℃预变性10分钟；94℃变性15秒，58℃延伸30秒，共进行40个循环，98℃保温10min，4℃保温5分钟终止反应。

10.一种用于检测人TERT启动子突变的引物和探针，包括以下引物和探针：

(1)用于检测TERT 228号密码子突变的引物和探针：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的下游引物，由SEQ ID NO:3所示的野生型探针和SEQ ID NO:4所示的突变型探针；

(2)用于检测TERT 250号密码子突变的引物和探针：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的下游引物，由SEQ ID NO:5所示的野生型探针和SEQ ID NO:6所示的突变型探针；

优选的，所述探针均带有荧光基团和淬灭基团，所述野生型探针与所述突变型探针的荧光基团不同；

进一步优选地，所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、Cy5和Cy3，所述淬灭基团选自MGB、BQH1、TAMARA和BHQ2；

更进一步优选的，所述野生型探针的荧光基团选自VIC，所述野生型探针的淬灭基团选自MGB，所述突变型探针的荧光基团选自FAM、所述突变型探针的淬灭基团选自MGB。