[发明专利]检测人TERT启动子突变的引物和探针、试剂盒和装置

说明书

本申请涉及基因突变检测领域，具体讲，涉及一种检测人TERT启动子突变的引物和探针、试剂盒和装置。该试剂盒检测复杂背景下的靶标序列灵敏度可达0.001％，即突变基因组DNA达到总DNA的0.001％即可检出。

技术领域

本申请涉及基因突变检测领域，具体讲，涉及一种检测人TERT启动子突变的引物和探针、试剂盒和装置。

背景技术

端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase，TERT)是端粒酶的催化亚单位，定位于5号染色体短臂的最末端(5p15.33)，为1个单拷贝基因，长度为40kb，由16个外显子和15个内含子组成，其中核心启动子区为330bp。端粒酶重新激活是细胞癌变的一个重要细胞生物学异常事件，是细胞永生化及肿瘤发生的关键步骤。TERT启动子突变有两种类型，分别发生在TERT转录起始位点上游-124和-146bp处，命名为C228T和C250T。TERT启动子检测对胶质瘤的诊断具有重要意义。

近年来，微滴式数字聚合酶链反应(Droplet Digital PCR，ddPCR)由于实现了超灵敏检测和绝对定量而受到越来越多的关注。微滴式数字PCR系统在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，对每个微滴的荧光信号进行逐一分析，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的首要发明目的在于提出一种检测人TERT启动子突变的引物和探针。

本发明的第二发明目的在于提出一种检测人TERT启动子突变的试剂盒。

本发明的第三发明目的在于提出一种检测人TERT启动子突变的装置。

为了完成本发明的目的，采用的技术方案为：

本发明提出一种用于检测人TERT启动子突变的微滴PCR试剂盒，所述试剂盒中含有TERT C228T ddPCR反应液和TERT C250T ddPCR反应液；

所述TERT C228T ddPCR反应液中含有用于检测TERT 228号密码子突变的引物和探针：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的下游引物，由SEQ ID NO:3所示的野生型探针和SEQ ID NO:4所示的突变型探针；

所述TERT C250T ddPCR反应液中含有用于检测TERT 250号密码子突变的引物和探针：由SEQ ID NO:1所示的上游引物，由SEQ ID NO:2所示的下游引物，由SEQ ID NO:5所示的野生型探针和SEQ ID NO:6所示的突变型探针。

可选的，所述探针均带有荧光基团和淬灭基团，所述野生型探针与所述突变型探针的荧光基团不同；

优选地，所述荧光基团选自FAM、VIC、HEX、Cy5和Cy3，所述淬灭基团选自MGB、BQH1、TAMARA和BHQ2；

进一步优选的，所述野生型探针的荧光基团选自VIC，所述野生型探针的淬灭基团选自MGB，所述突变型探针的荧光基团选自FAM、所述突变型探针的淬灭基团选自MGB。

可选的，引物和探针的浓度为0.1～5μM，优选的，引物的浓度为1.8μM，探针的浓度为0.4μM。

可选的，所述试剂盒中还含有ddPCR MIX3，所述ddPCR MIX3中的主要成分包括dNTPs、KCl、Tris-HCl、MgCl₂、DTT和Taq酶。