[发明专利]不同外观表型金线莲中黄酮成分的检测方法

说明书

本发明提供了不同外观表型金线莲中黄酮成分的检测方法，它是用高效液相色谱法检测，具体包括如下操作步骤：1)对照品溶液的制备；2)供试品溶液的制备；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，色谱柱：C18色谱柱；流动相:以0.1‑0.3％甲酸乙腈为流动相A，以0.1‑0.3％甲酸水为流动相B相梯度洗脱。本发明的检测方法，能同时测定不同外观表型金线莲中的芦丁、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素，以“水仙苷”为内参物同时分析种植金线莲中的芦丁、槲皮素、山奈酚和异鼠李素的一测多评法，简便、可靠，可以为种植金线莲的质量评价提供新的技术。本发明的一测多评法与外标法相互验证，无明显差异，结果可靠。

技术领域

本发明具体涉及不同外观表型金线莲中黄酮成分的检测方法。

背景技术

金线莲为兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roburghii(Wall.)Lindl的干燥全草，别名金线兰，金石松，金线虎头蕉等，性平、味甘，归肺、肝、肾、膀胱经，具有清热凉血、祛风利湿的功效，用于肾炎，膀胱炎，糖尿病，支气管炎，风湿性关节炎，小儿急惊风等症，享有“药王”的美称，临床上可用于治疗Ⅱ型糖尿病、老年高尿酸血症、儿科疾病等。现代药理研究表明，金线莲具有抗氧化、降血糖、保肝、抗炎、抗病毒、抗黑色素等药理活性。然而，由于金线莲自然繁殖率低，对生态环境要求严格，适应性较差，加之人工过度采挖，使得野生资源锐减，《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)将其列入附录Ⅱ的保护物种。

近年来，随着科研工作者开展金线莲种质资源保护、种苗繁育和人工栽培技术研究，种植规模迅速扩大，同时也形成了多个不同外观性状的金线莲，包括尖叶、大圆叶、小圆叶和红霞，见图1。然而，金线莲的质量标准体系研究相对滞后，目前多数文献认为黄酮为金线莲重要的药效物质，可以作为金线莲质量评价的重要指标，但公开报道的方法仅对2-3或者几种黄酮类成分进行分别测定，尚未未见一测多评法同时测定不同表型金线莲中黄酮类多指标成分，且采用黄酮多指标评价不同外观表型金线莲的文献也鲜有报道，影响了金线莲产业可持续发展。

发明内容

为解决上述问题，本发明建立了一种金线莲中黄酮成分的检测方法，它是用高效液相色谱法检测，具体包括如下操作步骤：

1)对照品溶液的制备：取黄酮类对照品，加甲醇溶解，即得；

2)供试品溶液的制备：取金线莲粉末，过筛，加甲醇提取，离心，取上清液，即得；

3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：C₁₈色谱柱；流动相:以0.1-0.3％甲酸乙腈为流动相A，以0.1-0.3％甲酸水为流动相B相；梯度洗脱程序如下：

进一步地，步骤1)所述黄酮类对照品为芦丁、水仙苷、槲皮素、山柰酚和/或异鼠李素。

进一步地，步骤1)所述对照品溶液为每1mL含45-50μg芦丁、50-70μg水仙苷、25-30μg槲皮素、10-15μg山柰酚和/或5-10μg异鼠李素；优选每1mL含49.44μg芦丁、60.06μg水仙苷、28.5μg槲皮素、12.35μg山柰酚和/或7.884μg异鼠李素；所述甲醇为50-100％甲醇，优选50％甲醇。

进一步地，步骤3)所述C₁₈色谱柱为UHPLC AQ-C18色谱柱，规格2.1mm×100mm，1.8μm。

进一步地，步骤3)所述分别吸取对照品溶液和供试品溶液的量为5μL；所述色谱条件的柱温为38℃，波长为368nm，流速为0.3mL·min^-1。

进一步地，步骤2)所述金线莲粉末过4号筛，所述金线莲粉末与甲醇的质量体积比为1：(40-60)g/ml，优选1：50g/ml；所述甲醇为80-100％甲醇，优选80％甲醇。