[发明专利]TROP2嵌合抗原受体、其T细胞及其制备方法和用途

权利要求书

1.编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸分子，其中所述的CAR包含：i)含有抗滋养层细胞表面抗原2结合结构域的抗体或抗体片段，ii)跨膜结构域，和细胞内信号传导结构域，其特征在于所述的含有抗滋养层细胞表面抗原2结合结构域的抗体或抗体片段包含重链互补决定区(CDR)和轻链互补决定区(CDR)，所述的重链互补决定区(CDR)和轻链互补决定区(CDR)由以下序列编码：

(a)重链互补决定区(CDR)1的核酸序列如SEQ ID NO:1所示；重链互补决定区(CDR)2的核酸序列如SEQ ID NO:2所示；重链互补决定区(CDR)3的核酸序列如SEQ ID NO:3所示；轻链互补决定区(CDR)1的核酸序列如SEQ ID NO:4所示；轻链互补决定区(CDR)2的核酸序列如SEQ ID NO:5所示；和轻链互补决定区(CDR)3的核酸序列如SEQ ID NO:6所示；或

(b)重链互补决定区(CDR)1的核酸序列如SEQ ID NO:7所示；重链互补决定区(CDR)2的核酸序列如SEQ ID NO:8所示；重链互补决定区(CDR)3的核酸序列如SEQ ID NO:9所示；轻链互补决定区(CDR)1的核酸序列如SEQ ID NO:10所示；轻链互补决定区(CDR)2的核酸序列如SEQ ID NO:11所示；和轻链互补决定区(CDR)3的核酸序列如SEQ ID NO:12所示。

2.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述的抗滋养层细胞表面抗原2结合结构域的抗体或抗体片段的核酸序列如SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:23所示。

3.根据权利要求1或2所述的核酸分子，其为分离的核酸分子。

4.一种嵌合抗原受体(CAR)，其含有由权利要求1或2所述的核酸分子编码的氨基酸序列。

5.一种含有权利要求4所述的嵌合抗原受体的T细胞。

6.一种载体，其包含权利要求1-3中任一项所述的核酸分子。

7.根据权利要求6所述的载体，其为病毒载体。

8.根据权利要求7所述的载体，其为慢病毒载体。

9.根据权利要求8所述的载体，其为慢病毒表达载体。

10.一种宿主细胞，其包含权利要求6-9中任一项所述的载体。

11.根据权利要求10所述的宿主细胞，其为人T细胞。

12.根据权利要求11所述的宿主细胞，其为人CD8⁺和/或CD4⁺T细胞。

13.一种获得CAR_TROP2-T细胞的方法，其包括以下步骤：使用权利要求6-9中任一项所述的载体转导人CD8⁺/CD4⁺T细胞。

14.一种获得CAR_TROP2-T细胞的方法，其具体包括以下步骤：

1)从人外周血分离PBMC；

2)对所述PBMC进行磁性分选，获得CD4⁺和/或CD8⁺T细胞悬液；

3)使用添加有IL-2和IL-7的培养液培养步骤2)所获得的T细胞悬液，其中所述培养的步骤中，细胞培养板包被有与细胞数量为1：1的CD3/CD28磁珠；

4)构建CAR_TROP2慢病毒载体，并包装为质粒，所述的构建CAR_TROP2慢病毒载体是通过构建权利要求9所述的慢病毒表达载体实现的；

5)将所述T细胞悬液用CAR_TROP2慢病毒包装质粒进行感染；获得目的CAR_TROP2-T细胞。