[发明专利]TROP2嵌合抗原受体、其T细胞及其制备方法和用途

说明书

本发明提供一种抗‑滋养层细胞表面抗原2嵌合抗原受体、其T细胞及其制备方法和用途，该抗‑滋养层细胞表面抗原2嵌合抗原受体包含抗‑滋养层细胞表面抗原2的scFv抗体、以及IgG4铰链区、CD28跨膜区、CD3胞内区和41BB胞内区，还提供编码它的核酸，包含该核酸的载体，包含该载体的宿主细胞；还提供一种使用上述载体转导人CD8+/CD4+T细胞获得CAR_TROP2‑T细胞的方法。该细胞为T细胞经过基因修饰和改造得到，可用于治疗滋养层细胞表面抗原2表达相关疾病，尤其是特异性识别和杀伤表达滋养层细胞表面抗原2的肿瘤。

技术领域

本发明属于肿瘤治疗技术领域，具体涉及一种将T细胞进行基因工程以表达嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)用于治疗与滋养层细胞表面抗原2(Trophoblast cell-surface antigen-2，TROP2)的表达相关的疾病。

背景技术

2011年，癌症超过心脏病，成为全球第一大死亡原因。WHO在2013年12月公布，全球每年新增癌症患者数已经超过1400万名，这与2008年的统计结果1270万人相比，人数大幅增加。同期，癌症患者的死亡人数也有所增加，从过去的760万人增加到820万人。根据中国医学科学院肿瘤医院、国家癌症中心赫捷院士、全国肿瘤登记中心主任陈万青教授等在《CA：A Cancer Journal for Clinjicians》杂志(影响因子144.8)发表的2015年中国癌症统计数据：2015年我国肿瘤新发病例为429.2万。报告称，到2030年，新增癌症病例将增加50％，达到每年2160万人。

针对肿瘤，传统的手术切除、化疗、放射线治疗，对正常组织有伤害，具有局限性，效果有限。近年来出现的靶向疗法在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，不会伤及肿瘤周围的正常组织细胞；但分子靶向药物有效性低，某种药物只能对特定突变基因型肿瘤产生作用；肿瘤基因突变产生药物耐受性导致长期的治疗效果下降；存在严重的不良反应；部分肿瘤不能通过靶向药物得到有效治疗。新的免疫疗法正能够解决这些问题。

肿瘤免疫治疗通过调动机体的免疫系统，增强肿瘤微环境抗肿瘤能力，从而控制和杀伤肿瘤细胞；当免疫系统由于自身或肿瘤细胞原因被削弱时，为肿瘤的发生提供有利条件。肿瘤免疫疗法即通过加强免疫系统在各步骤中对肿瘤细胞的识别与杀伤能力。近年来，随着干细胞生物学、免疫学、分子技术、组织工程技术等的快速发展，细胞免疫治疗作为一种安全而有效的治疗手段，在肿瘤等治疗中的作用越来越突出。当前，新型细胞治疗技术的研究和开发已经成为解决肿瘤等相关疾病的重要研究领域。

2013年免疫抗癌疗法被Science杂志评为年度10大科技突破之首。自2013年以来，肿瘤细胞及免疫疗法不断获得突破性进展，临床研究也取得了巨大成功，是当前肿瘤治疗领域最具前景的治疗手段，有望成为继手术、放化疗方法后的新的常规治疗方法。细胞治疗方法包括非特异性免疫疗法和特异性免疫疗法。后者又包括单克隆抗体，过继细胞疗法(ACT)：TIL(肿瘤浸润淋巴细胞)、CAR-T和TCR(T细胞受体)，DC(树突状细胞)疫苗和肿瘤疫苗等。

肿瘤特异性CTL(细胞毒性T淋巴细胞)细胞是体内杀伤肿瘤细胞的直接效应细胞，通过细胞表面的TCR识别肿瘤细胞表面呈递的肿瘤抗原和HLA分子复合物，激活CTL细胞内一系列反应，通过分泌穿孔素、颗粒酶等直接杀伤肿瘤细胞。近年来科学家们研究了肿瘤突变产生的新表位对机体抗肿瘤作用的影响，有望推动肿瘤特异性T细胞治疗技术的进步和临床应用。现有临床研究表明，肿瘤组织处肿瘤特异性突变，尤其是免疫原性区域抗原的突变，能够产生新的、肿瘤特异性抗原，这些抗原能够激发体内特异性T细胞免疫反应，产生的T细胞表面TCR亲和力较高，从而有效发挥肿瘤细胞杀伤功能。然而肿瘤组织处的免疫耐受环境限制了特异性T细胞的有效激活和功能发挥，需要体外环境下实施人为干预，对突变抗原特异性T细胞进行体外扩增和活化。