[发明专利]一种靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体的制备方法与用途

权利要求书

1.一种靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体的制备方法，其特征在于，N-异丙基丙烯酰胺，N-叔丁基丙烯酰胺，十二烷基磺酸钠，带电功能单体，N,N'-亚甲基双丙烯酰胺作为交联剂，心肌肌钙蛋白I全蛋白、或心肌肌钙蛋白I的多肽片段作为模板分子，在引发剂作用下通过聚合后洗脱模板分子得到靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体；N-异丙基丙烯酰胺的用量为5-60wt％，N-叔丁基丙烯酰胺的用量为5-50wt％，带电功能单体的用量为0.5-20wt％，N,N'-亚甲基双丙烯酰胺的用量为0.5-10wt％；

所述带电功能单体包括N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸、丙烯酸、甲基丙烯酸、1-乙烯基咪唑、N-(3-二甲氨基丙基)甲基丙烯酰胺、(3-丙烯酰胺基丙基)三甲基氯化铵、N-(2-氨基乙基)丙烯酰胺、N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐盐酸盐中的任意一种或几种。

2.根据权利要求1所述靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体的制备方法，其特征在于，聚合的方法为反相乳液聚合或沉淀聚合。

3.根据权利要求1所述靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体的制备方法，其特征在于，引发剂为过硫酸铵或偶氮二异丁腈。

4.根据权利要求2所述靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体的制备方法，其特征在于，氮气氛围下的聚合反应温度为25-70℃，聚合反应时间为3-36h。

5.根据权利要求1所述靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体的制备方法，其特征在于，模板分子洗脱溶液为NaCl、柠檬酸钠、甘氨酸或十二烷基磺酸钠中的任意一种，或者通过改变温度和pH值实现模板分子的洗脱。

6.根据权利要求1所述靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体的制备方法，其特征在于，纳米人工抗体的粒径为10-3000nm。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的方法制备得到的靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体，其特征在于，将所述的靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体用于结合磁性纳米颗粒、整体柱或微流控芯片实现血清样品中低丰度心肌肌钙蛋白I的高选择性富集，结合高灵敏度拉曼光谱、荧光定量检测、ELISA试剂盒、化学发光试剂盒、试纸条、电化学传感器、免疫浊度、免疫层析、超声波检测、CT检测和核磁检测方法实现肌钙蛋白的高灵敏度检测。

8.一种基于权利要求1-6任意一项所述的方法制备得到的靶向心肌肌钙蛋白I的纳米人工抗体的双发射荧光量子点试纸条的制备方法，其特征在于，所述的制备方法的具体步骤为：

(1)蓝色荧光碳量子点的合成

称取4.2g柠檬酸固体于50mL离心管中，加入40mL水使固体完全溶解，加入乙二胺溶液1.34mL，柠檬酸和乙二胺的摩尔比为1:1，搅拌使其分散均匀，将液体转移至聚四氟乙烯反应釜中，将反应釜置于200℃烘箱中反应5h；反应结束待其冷却至室温，用截留分子量为1000Da的透析膜透析1天，透析结束后收集备用；

(2)红色荧光碳量子点的合成

将0.1g间苯二胺、1mL氨水加入10mL乙醇溶液中，超声搅拌10min使其溶解，然后将得到的溶液转移至聚四氟乙烯反应釜中，将聚四氟乙烯反应釜置于烘箱中，在180℃下反应6h，反应结束后自然冷却至室温，将得到的碳量子点用乙醇稀释到909.61mg/L可得到红色荧光碳量子点；

(3)纳米人工抗体双发射荧光量子点试纸条的制备

4.2g柠檬酸固体用40mL水溶解后，加入1.34mL乙二胺溶液混匀，在聚四氟乙烯反应釜中200℃下反应5h，反应结束后待其冷却至室温用1000Da的透析袋透析1天，得到碳量子点；向8.5mL乙醇溶液和1.5mL水的混合溶液中加入500μL TEOS，磁力搅拌10min后将合成的蓝色荧光碳量子点3mL加入到反应体系中搅拌30min，最后加入500μL氨水搅拌4h，反应结束后在12000r/min下离心10min，沉淀用乙醇和水多次洗涤，得到将碳量子点包封在二氧化硅中的纳米颗粒，此时的二氧化硅纳米颗粒显蓝色荧光；将红色荧光碳量子点和肌钙蛋白I模板分子印迹在纳米人工抗体表面形成显红色荧光的分子印迹纳米颗粒MIP，显红色荧光的MIP包裹在显蓝色荧光的二氧化硅纳米颗粒表面，然后将模板分子洗脱，由于荧光的叠加，纳米人工抗体双发射荧光量子点呈紫色荧光；

接着当待检测蛋白与纳米人工抗体双发射荧光量子点接触后，会与最外层的空腔结合，同时引起最外层红色荧光量子点的荧光淬灭，使得纳米人工抗体双发射荧光量子点由紫色荧光变为蓝色荧光；将剪裁好的滤纸条浸在制好的纳米人工抗体双发射荧光量子点溶液中，然后将待检测样本滴在试纸条上，用紫外灯照射，可以实现待检测样本的可视化检测。