[发明专利]一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂，其特征在于，其有效成分为哈茨木霉孢子和含中药药渣的固体培养基粉碎基质。

2.根据权利要求1所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂，其特征在于，所述哈茨木霉孢子和含中药药渣的固体培养基粉碎基质质量比为1:10～50。

3.根据权利要求1所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂，其特征在于，所述的木霉孢子制剂的剂型为颗粒剂或可湿性粉剂。

4.一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、菌种活化：将哈茨木霉出发菌株M-17菌种接种到PDA培养基斜面上，黑暗条件下，25～28℃培养5～7d；

步骤二、种子液培养：将步骤一活化好的菌种接种到灭菌的种子培养基中进行培养；

步骤三、固体发酵：将步骤二培养好的种子液接种到灭菌的固体发酵培养基中，待菌丝长满培养基得到含哈茨木霉孢子的固体发酵物；

步骤四、孢子分离：将固体发酵物自然风干，含水量控制5～20％，过100目收集哈茨木霉孢子；

步骤五、固体培养基粉碎：收集完哈茨木霉孢子的固体培养基进一步烘干，烘干温度不超过80℃，烘干至水分含量5～10％，烘干后进行粉碎，过60目筛备用；

步骤六、制剂制备：将哈茨木霉孢子和培养基粉碎基质按比例混合，加入其它载体制备哈茨木霉固体制剂。

5.根据权利要求4所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂的制备方法，其特征在于，步骤一中PDA培养基制作方法为：

1)先按以下配比称取培养基各组分：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，蒸馏水1000ml；

2)土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20～30min，用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取，滤液补充蒸馏水分到1000ml；

3)把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，待琼脂完全溶解后，进行分装，121℃灭菌25～30min后自然冷却倒斜面和平板，凝固后备用。

6.根据权利要求4所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂的制备方法，其特征在于，步骤二中种子培养基为蔗糖15～20g/L，酵母粉3～6g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1～0.3g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2～1.5g/L，KH₂PO₄ 3.5～4.5g/L，NaNO₃ 6.5～7.0g/L；培养基湿热灭菌条件为121℃，25～30min；接种量为；培养条件为黑暗条件下在摇床25～28℃培养3～6d，摇床转速180～220rpm。

7.根据权利要求4所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂的制备方法，其特征在于，步骤三中固体发酵培养基为中药渣粉30～70％、马铃薯全粉10～20％、玉米粉10～30％、木屑0～15％，马铃薯皮5～7％，加水量为以上组分质量的70～80％；灭菌条件为蒸汽灭菌，121～125℃，维持45～60min，冷却后接入10～15％的种子液，于25℃下静止培养3d，翻拌一次后继续培养3～6d，培养过程每天通风四次，每次30min，通风量0.2～0.5vvm，相对湿度控制55～80％，待菌丝长满培养基后固体发酵结束。

其中中药渣粉为中药煎煮后剩余药渣烘干粉碎过60目，按质量组成为甘草药渣粉0～100％、板蓝根药渣粉0～100％、葡萄酒皮渣0～60％。

8.根据权利要求4所述的一种用于防控马铃薯根腐病的哈茨木霉固体制剂的制备方法，其特征在于，步骤六颗粒剂和可湿性粉剂的制备步骤为：

A、哈茨木霉颗粒剂制备工艺为：

将哈茨木霉孢子和含中药药渣的固体培养基粉碎基质按质量比为1:100～500混合，加入浓度为0.1～1％w/v的淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素常用粘结剂中的一种或几种的组合，粘结剂溶液所用重量为颗粒剂预期总重量的1～3％，充分混合均匀；上述混合均匀的固体发酵载体中加入米糠粉、麸皮粉、白炭黑、膨润土、硅藻土、轻质碳酸钙常用包衣剂中一种或几种的组合，包衣剂重量占颗粒剂预期制备总重量的10～90％，充分混合均匀，50℃以下烘干后包装，得木霉孢子颗粒剂；

B、哈茨木霉可湿性粉剂制备工艺为：

将上述收集孢子后的含中药药渣的固体培养基80℃以下烘干，用低温气流粉碎机粉碎，和哈茨木霉孢子混合，加入分散剂、润湿剂，混匀后制成可湿性粉剂。其中分散剂为十二烷基苯磺酸钠、NO、NNO、MF、木质素磺酸钠中的一种或几种的组合，分散剂重量为可湿性粉剂预期总重量的2～10％；润湿剂为茶枯、皂角、十二烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚中的一种或几种的组合，润湿剂重量为可湿性粉剂预期总重量的0.5～3％；载体为硅藻土、白炭黑、膨润土、轻质碳酸钙、凹凸棒土、高岭土中的一种或几种的组合，载体重量为可湿性粉剂预期总重量的10～90％。