[发明专利]貉细小病毒性肠炎、犬瘟热二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及貉细小病毒性肠炎、犬瘟热二联灭活疫苗及其制备方法。该二联灭活疫苗有效成分包括重组杆状病毒RDPV‑SN1株转染Sf9细胞培养获得的貉细小病毒VP2蛋白和犬瘟热病毒灭活抗原。本发明针对貉犬瘟热、细小病毒二联活疫苗存在毒力返强风险，而市场上使用的二联灭活疫苗普遍存在貉细小病毒灭活后免疫效力较低问题，提供了一种由貉细小病毒VP2蛋白与病毒含量较高的犬瘟热病毒灭活抗原制备的二联灭活疫苗。该二联苗可同时应用于貉细小病毒性肠炎和犬瘟热两种疾病的预防，具有免疫原性好、安全性高、可控性强、培养效率和自动化程度高、可规模化生产等优势，可达到“一针两防”目的，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种貉细小病毒性肠炎、犬瘟热二联灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品领域。

背景技术

貉细小病毒性肠炎是由细小病毒科细小病毒属貉细小病毒引起的急性、高度接触性传染病。目前貉细小病毒性肠炎广泛存在于世界各个国家，该病主要引起貉的肠炎，死亡率可达30％～60％。

犬瘟热是由副黏病毒科麻疹病毒属犬瘟热病毒(Canine Distemper virus，CDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，幼龄动物多为急性、致死性经过，成年动物可成慢性、持续性感染，临床症状以双相体温升高、伴有卡他性肺炎、胃肠炎为主要特征，偶有神经症状出现，容易继发其他细菌病毒的混合感染和二次感染，死亡率可高达80％，是危害我国毛皮动物养殖业的最严重的疫病之一。貉犬瘟热全年任何季节都能够发生，尤其是仔貉在断乳前后以及育成期更加敏感，具有非常高的发病率和死亡率。

由于貉犬瘟热和细小病毒性肠炎具有发病急、缺乏特效治疗方法的特点，目前仍以疫苗接种作为主要的防控手段。

目前市场上无貉专用的犬瘟热、细小病毒性肠炎疫苗销售，很多养殖户使用替代疫苗，无法取得较好的免疫保护效果，因此，往往需要对貉进行二次免疫，既提高了成本，又加大了养殖户的工作量，同时引起貉子较大的应激反应。且犬瘟热疫苗多为活苗，存在毒力返强的风险；细小病毒性肠炎制备的疫苗主要为全病毒灭活疫苗或活疫苗，灭活疫苗免疫原性较差，活疫苗存在毒力返强的风险。

因此，貉细小病毒杆状病毒载体、犬瘟热二联灭活疫苗的研制迫在眉睫，可有效控制貉犬瘟热和细小病毒性肠炎，实现“一针两防”目的。

发明内容

我们从临床疑似貉细小病料中分离出一株貉细小病毒，并成功扩增出该貉细小病毒VP2基因，我们采用昆虫细胞杆状病毒——苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒表达系统构建了表达貉细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒，转染SF9细胞，培养并获得病毒样颗粒，该病毒样颗粒具有良好的免疫原性、安全性；我公司分离的犬瘟热自然弱毒株CDV-11株，经悬浮培养，病毒含量在10^7.5TCID₅₀/ml以上，经灭活后，仍对貉子具有较好的免疫原性，灭活后安全性高。

本发明的目的是提供一种貉细小病毒性肠炎、犬瘟热二联灭活疫苗及其制备方法，以应对目前貉细小病毒性肠炎和犬瘟热流行形势。

本发明的技术方案

1.一种貉细小病毒性肠炎、犬瘟热二联灭活疫苗，其特征在于该疫苗的有效成分包括重组杆状病毒RDPV-SN1株表达的貉细小病毒VP2蛋白、犬瘟热病毒CDV-11株灭活抗原、氢氧化铝胶佐剂；所述该疫苗用于预防貉犬瘟热和细小病毒性肠炎。

2.本发明所述貉细小病毒性肠炎、犬瘟热二联灭活疫苗，其特征在于所述的貉细小病毒VP2蛋白是由表达貉细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒RDPV-SN1株转染Sf9细胞，培养至细胞出现感染获得，该毒株被命名为苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒重组杆状病毒RDPV-SN1株，已于2019年05月16日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No.17685。