[发明专利]抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒的制备方法及应用

说明书

抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒的制备方法，所述制备方法为：将聚乙烯亚胺包裹的中孔二氧化硅纳米颗粒加入到将含有吡咯喹啉醌的磷酸缓冲溶液，震荡12小时左右；然后加入含有检测抗体的磷酸缓冲溶液，继续震荡反应1小时左右，离心洗涤，下层沉淀分散于磷酸缓冲溶液，于4℃下保存备用；使用前，用含有牛血清白蛋白的磷酸缓冲溶液稀释。抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒的应用，所述的抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒用于抗原检测。本发明简单灵敏、直观、高通量、不需要特殊仪器等优点。

技术领域

本发明涉及免疫分析检测，特别涉及一种用于免疫分析检测的抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒及检测方法，属于化学领域。

背景技术

可视化免疫分析法具有操作简单、不需要特殊仪器等特点，在各种疾病的预防、诊断和治疗中受到了广泛的关注。目前，标准化的可视化免疫分析法通常使用酶标记的抗体来催化显色反应，进而达到定量分析的目的。然而，在实际应用中，天然酶存在诸多问题，比如热稳定性差、易受环境影响、制备和纯化费用高、灵敏度低等。

随着纳米科技与纳米材料的发展，基于纳米材料的可视化免疫分析法的灵敏度和稳定性得到了显著提升。一般来说，纳米材料在可视化免疫分析实验中的作用可以分为四种类型：作为纳米酶催化显色反应；作为显色底物，通过目标分子引起纳米材料聚集或形貌尺寸的变化；作为载体，负载大量的天然酶或者显色剂；作为前驱体，释放出能够催化显色反应的金属离子。其中，纳米酶具有成本低、催化活性可控、稳定性高等优点。纳米酶主要包括碳、金属和金属氧化物等纳米材料。在葡萄糖和过氧化氢的催化反应中，它们通常发挥类似于氧化酶、过氧化氢酶或歧化酶的功能。基于纳米酶的免疫分析方法简单有效，但是，纳米酶在可视化免疫分析的实际应用方面仍存在着一些问题。例如，相比于天然酶，大部分纳米酶具有较低的催化活性，弱的结合力和较差的底物特异性。在实验过程中，需要对纳米材料的表面进行修饰，从而进行分子识别和降低非特异性吸附。然而，这些修饰成分通常会降低纳米酶（特别是金属和金属氧化物类纳米材料）的催化活性。因此，构建用于可视化免疫分析的新型纳米酶或纳米催化体系具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服目前的抗原检测方法中存在的上述缺陷，提供一种抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒的制备方法及应用。

为实现本发明的目的，采用了下述的技术方案：抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒的制备方法，所述制备方法为：将聚乙烯亚胺包裹的中孔二氧化硅纳米颗粒加入到将含有吡咯喹啉醌的磷酸缓冲溶液，震荡12小时左右；然后加入含有检测抗体的磷酸缓冲溶液，继续震荡反应1小时左右，离心洗涤，下层沉淀分散于磷酸缓冲溶液，于4 ℃下保存备用；使用前，用含有牛血清白蛋白的磷酸缓冲溶液稀释。

进一步的；所述的聚乙烯亚胺包裹的中孔二氧化硅纳米颗粒采用以下方法制备：

A：中孔二氧化硅纳米颗粒的制备：将十六烷基三甲基溴化铵溶解于超纯水中，然后加入氢氧化钠溶液，于80 ℃下搅拌反应15 min，再缓慢加入四乙氧基硅烷溶液，剧烈搅拌20 min，将得到的白色沉淀抽滤，用水和甲醇依次洗涤，再于80 ℃下干燥；干燥后的固体分散于盐酸和甲醇的混合溶液中，回流反应12小时左右，再次用水和甲醇洗涤，在60 ℃下进行真空干燥，即得到中孔结构的二氧化硅纳米颗粒；

B：聚乙烯亚胺包裹的中孔二氧化硅纳米颗粒的制备：即将步骤（1）中制备得到的中孔二氧化硅纳米颗粒加入到聚乙烯亚胺水溶液中，搅拌反应12小时左右，离心洗涤，在60℃下进行真空干燥。

抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒的应用，所述的抗体功能化的负载吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅纳米颗粒用于抗原检测。