[发明专利]用于五种呼吸道病毒检测的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种用于建立同时检测人副流感病毒(HPIV I型和Ⅲ型)、人偏肺病毒(HMPV)、人鼻病毒(HRV)以及人呼吸道合胞病毒(HRSV)的极速检测试剂盒及其应用。本发明具备很高的灵敏度和特异性，其建立的方法与其他荧光定量PCR相比，可在半小时内获得结果，可达到临床快速检测，有望实现真正的POCT，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及用于五种呼吸道病毒检测的试剂盒及其应用。

背景技术

人副流感病毒(human parainfluenza virus，HPIV)又名仙台病毒(SendaiVirus，SeV)属副粘病毒科，为负性单链RNA病毒，是常见的社区获得性呼吸道感染病原，因其诸多特性与流感病毒不同，且又陆续分离得到其他毒株，故被命名为副流感病毒，根据遗传学和血清学特征，HPIV可分为1型，2型，3型和4型。人副流感病毒是常见的急性病毒性呼吸道传感染性疾病的病原体，能引起婴儿下呼吸道感染和成人上呼吸道感染，与鼻病毒、冠状病毒、腺病毒等多种病毒均被认为是引起普通感冒的病原体。1型可引起严重的喉炎(假膜性喉炎)、气管炎或支气管炎；2型与1型引起病症的临床表现相似，但不严重，只有在感染2～4岁儿童时，才可发生严重的感染病例；3型是仅次于呼吸道合胞病毒的婴儿支气管炎和肺炎的病原体，常引起婴幼儿细支气管炎和肺炎，也可导致假膜性喉炎；4型引起的病症较轻，多引起成人和儿童的上呼吸道感染，通常不引起肺炎。大约30-40％的婴幼儿急性呼吸道感染都是由人副流感病毒引起的。

人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus，HRSV)是一种RNA病毒，属副粘液病毒科，是引起小儿病毒性肺炎最常见的病原，可引起间质性肺炎，及毛细支气管炎。几乎所有儿童2岁时都经历过1次或多次感染，感染的高峰年龄为2个月至8个月。是婴儿、小龄儿童下呼吸道感染的首要原因，是引起小儿病毒性肺炎最常见的病原。该病经空气飞沫和密切接触传播，感染极广。潜伏期3-7日，婴幼儿症状较重，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表现为细支气管炎及肺炎。由于母传抗体不能完全地预防感染的发生，合胞病毒肺炎在出生后任何时候都可能发生。由于抗体不能完全防止感染，合胞病毒的再感染极为常见。合胞病毒通常在冬、春季节流行。

人偏肺病毒(human Metapneumovirus，HMPV)是一种RNA病毒，属偏肺病毒属。HMPV感染好发于婴幼儿、老人及有免疫缺陷的患者，可引起上、下呼吸道疾病，是呼吸道感染的重要病原。HMPV感染上呼吸道，导致流涕、咳嗽和发热，引起鼻炎、咽炎、中耳炎和口腔炎，下呼吸道感染的主要疾病为肺炎和毛细支气管炎。HMPV可诱发哮喘。病毒可经由直接接触传染性的分泌物而传播，潜伏期一般为3-5日。HMPV感染在大多数地区全年散发，好发于冬、春季节。

鼻病毒(rhinovirus)本身为无包膜的二十面体结构，基因组长7.2-8.5kb，为单链正向RNA基因组。HRV分类上属小RNA病毒科，全年均有感染发生，春秋季高发，人普遍易感。人鼻病毒在世界范围内流行并且是普通感冒最重要的病原之一。鼻病毒主要传播途径是通过带有鼻病毒的飞沫、气溶胶经呼吸道或人与人接触传播。鼻病毒是普通感冒的重要病原体，对于儿童和患有呼吸道基础疾病的易感群体，HRV感染后还可能会出现较为严重的后遗症。不同的肠道病毒可以引起相同的临床症状，如麻痹、无菌性脑膜炎、急性上呼吸道感染。近年来高致病性禽流感在世界各地的爆发呈上升趋势，不但严重危害禽类，也威胁哺乳动物，尤其是感染人类并致死，已对人类健康造成极大威胁，因此建立快速、准确的病毒检测手段至关重要。

目前对于呼吸道病毒感染的临床诊断，多以临床症状及流行病学资料作为依据，而确诊需用病毒分离培养、血清学检测及病毒核酸的分子生物学检测等实验室诊断。在这些方法中，基于荧光定量的病毒核酸检测最为常用。而传统的荧光定量PCR方法尚存在试剂价格高，检测时间长、无法达到真正的即时检验(point-of-care testing,POCT)，不能实现便携、可移动及现场快检的要求。

发明内容