[发明专利]侧耳属线粒体nad4L基因的扩增引物及其在鉴定侧耳属物种中的应用

权利要求书

1.侧耳属线粒体nad4L基因的扩增引物，其特征在于，其包括上游引物和下游引物，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的侧耳属线粒体nad4L基因的扩增引物在鉴定侧耳属物种中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，其包括如下步骤：

根据侧耳属物种的线粒体nad4L基因序列中的保守序列设计上游引物和下游引物；

用所述上游引物和下游引物PCR扩增侧耳属线粒体nad4L基因，若PCR产物中无非特异性扩增，则引物特异性良好；

用所述上游引物和下游引物PCR扩增待测物种线粒体nad4L基因，若PCR产物中无非特异性扩增，则该待测物种为侧耳属物种。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，上游引物和下游引物之间的扩增片段在200-300bp；引物序列中GC含量为40％-60％。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，PCR反应时，30μL体系包括：

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，PCR程序为：95℃5min；94℃45s，56℃35s，72℃1min，35个循环；72℃延伸10min。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，PCR产物用1％的琼脂糖凝胶进行电泳检测，若PCR产物泳道上有且只有一条带，则无非特异扩增产生。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，电泳检测后，若无非特异性扩增，回收PCR产物，纯化后测序，测序结果与已知的侧耳属物种nad4L数据库中的物种DNA序列进行比对，构建系统发育树，检验PCR产物序列与已知的侧耳属物种nad4L数据库中序列聚类在一起的物种，若待测物种与数据库中的物种构成单支系，则待测物种鉴定为该物种。