[发明专利]抗乙型肝炎病毒表面抗原前S1抗原的纳米抗体及其用途

说明书

本发明公开了抗乙型肝炎病毒表面抗原前S1抗原(HBV‑preS1)的纳米抗体。本发明通过用HBV‑preS1免疫羊驼，筛选得到了抗HBV‑preS1的纳米抗体。本发明还涉及这些抗体的片段及与Fc融合组成的完整抗体，该抗体用于乙型肝炎病毒及肝癌的治疗，和制备该抗体的方法。

技术领域

本发明涉及抗体药物技术领域，尤其涉及抗乙型肝炎病毒表面抗原前S1抗原(HBV-preS1)的纳米抗体序列。该发明用于诊断或治疗乙型肝炎病以及肝癌的用途。

背景技术

本发明涉及抗乙型肝炎病毒表面抗原前S1抗原(HBV-preS1)的纳米抗体，该发明用于诊断或治疗乙型肝炎病以及肝癌。

经过三十多年的发展，治疗性单克隆抗体药物在肿瘤及自身免疫病领域已经取得了重大进展，现成为临床治疗此类疾病的重要手段之一。发展针对HBV的治疗性抗体，有望为慢性HBV感染提供新的治疗策略。

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的感染是全球共同面临的严重的公共卫生问题。统计结果显示，全球有超过20亿人感染过HBV，其中约有3.5亿人为慢性HBV感染(Chronic hepatitis B，CHB)。由于HBV感染的感染率极高，并且由慢乙肝患者发展成的肝癌死亡率在我国癌症总死亡率中排名第二，因此乙型肝炎对我国造成了严重的经济负担。HBV的感染在各个国家及地区存在极大的的差异，大部分乙肝携带者集中在亚洲、非洲和西太平洋地区。因此乙型肝炎病毒感染，并由其所引发的一系列肝炎、肝硬化及肝癌等肝脏疾病已成为全世界公共健康问题之一。

因此HBV感染，尤其是慢性HBV感染，造成的慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌等肝脏疾病给患者带来沉重的经济负担。目前已经批准的应用于慢乙肝临床治疗的药物有干扰素和核苷类似物两类，尽管在抑制病毒复制和延缓疾病进展上起到积极的效果，但仍然存在治疗周期长、应答率低、副反应较严重(干扰素类)以及潜在耐药性(核苷类似物)等问题，因此，急需发展基于新靶点或新机制的抗HBV药物。

HBV基因组大小为3.2kb碱基对(base pair，bp)的小环形DNA(3182～3221,不同亚型的HBV病毒基因组长度略有差别)，是目前已知最小的真核细胞DNA病毒之一。HBV基因组有4个开放阅读框(Open reading frame，ORF)：S-ORF、P-ORF、C-ORF、X-ORF。S-ORF编码三个包膜蛋白SHBs(S)、MHBs(preS2+S)和LHBs(preS1+preS2+S)。C-ORF有前C区(preC)和C基因区，前者是一种分泌型蛋白(HBeAg)，对于慢性感染免疫耐受的形成具有重要的作用，后者组成病毒Capsid，并包裹病毒基因组，HBV基因组中的这一区段最保守，是免疫攻击的靶表位。X-ORF的基因产物HBx蛋白具有转式激活增强子和启动子的转录功能，是一种多功能的反式调节因子，与病毒感染、转录、复制、细胞凋亡和HCC发生均有重要联系。P-ORF是HBV基因组中最长的ORF，负责转录DNA聚合酶。此外，HBV的各个开放阅读框高度重叠，具有非常紧致的结构。

HBV基因组含4个基因，转录出4种不同的mRNA并可以编码合成9种不同的病毒蛋白，包括组装病毒的外膜蛋白(L-HBsAg，M-HBsAg，S-HBsAg)和核壳(HBcAg)的结构蛋白；3种P蛋白(末端蛋白，DNAp和RNA酶H)和调节病毒复制功能的HBx蛋白,另一种pc/C基因编码的HBeAg蛋白也一种是功能蛋白。

乙型肝炎病毒外膜蛋白(HBsAg)又称为澳大利亚抗原，最早是由Blumberg在1965年发现，而且被广泛应用于定量血清中HBsAg的值来预测病人HBV感染水平。HBV的外膜蛋白由S-ORF编码合成，包括L-HBsAg，M-HBsAg和S-HBsAg3种外膜成分，3种蛋白有各自的起始密码，但共同合用S-HBsAg的终止密码。