[发明专利]一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法及其应用在审
| 申请号： | 201910668385.1 | 申请日： | 2019-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN110408641A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 彭文舫;王柏炀;郑艳丽;易犁;张桂敏;马立新 | 申请（专利权）人： | 湖北大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/65;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 430062 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 假诺卡氏菌 遗传转化 微生物技术领域 大肠杆菌菌株 菌株遗传 细菌接合 质粒转化 质粒转移 外源DNA 接合 菌株 孢子 应用 | ||
1.一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将假诺卡氏菌置于CP培养基培养，获取孢子；
步骤2：将pSET152质粒转化至感受态细胞，并置于含抗生素的LB培养基培养；
步骤3：将步骤1获得的假诺卡氏菌孢子与步骤2获得的转化后的感受态细胞混合，并置于ISP4固体培养基培养；
步骤4：将阿泊拉霉素和萘啶酮酸覆盖步骤3中的ISP4固体平板，继续培养完成接合转移。
2.根据权利要求1所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于：步骤1中，将假诺卡氏菌置于固体CP培养基30℃培养4天，可在平板表面获取孢子。
3.根据权利要求1所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于：步骤2中所述感受态细胞为ET12567/pUZ8002感受态细胞，所述ET12567/pUZ8002感受态细胞在浓度均为25ug/mL的卡那霉素和氯霉素存在的条件下制备。
4.根据权利要求3所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于：步骤2中所述抗生素为卡那霉素，氯霉素和阿泊拉霉素的混合物。
5.根据权利要求4所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于：步骤2中将转化后的感受态细胞培养至OD600达到0.4-0.6。
6.根据权利要求5所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于：步骤3中在ISP4固体培养基培养12-13小时。
7.根据权利要求1所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于：步骤4中将阿泊拉霉素和萘啶酮酸覆盖ISP4固体平板，晾干40min，30℃培养箱培养6天。
8.根据权利要求1所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于：步骤2中将外源DNA片段构建至pSET152质粒中后，再进行后续遗传转化实验。
9.根据权利要求8所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法，其特征在于：所述外源DNA片段包括启动子片段。
10.如权利要求1-9任一所述的一种假诺卡氏菌株的遗传转化方法在将外源DNA片段导入假诺卡氏菌株中的应用。
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