[发明专利]一种识别玉米赤霉烯酮的单克隆抗体及其应用在审
申请号: | 201910668632.8 | 申请日: | 2019-07-23 |
公开(公告)号: | CN110396126A | 公开(公告)日: | 2019-11-01 |
发明(设计)人: | 武玉香;沈志强;于金枝 | 申请(专利权)人: | 山东绿都生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K16/14 | 分类号: | C07K16/14;G01N33/74;G01N33/577 |
代理公司: | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人: | 朱芳 |
地址: | 256600 山东省滨州*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 酶联免疫吸附法 应用 检测灵敏度 特异性结合 免疫层析 荧光检测 保藏 细胞株 合柱 分泌 检测 | ||
1.一种识别玉米赤霉烯酮的单克隆抗体,其特征在于,由保藏编号为CCTCC NO:C2019153的ZEN 6G1细胞株分泌得到。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体,其特征在于,所述杂交瘤细胞株6G1是将玉米赤霉烯醇与载体蛋白偶联后作为全抗原,经免疫融合筛选得到。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体,其特征在于,所述载体蛋白为牛血清白蛋白、齿孔血蓝蛋白或卵清白蛋白。
4.根据权利要求2或3所述的单克隆抗体,其特征在于,所述全抗原通过如下方法制得:
(a)将玉米赤霉烯醇溶解于N,N-二甲基甲酰,随后置入N,N-羰基二咪唑、混匀,得到混合物;
(b)将混合物在摇晃条件下进行反应;
(c)向载体蛋白中添加缓冲液,得到混合液;
(d)将混合液置入反应后的混合物中,在摇晃条件下进行反应,即得所述全抗原。
5.根据权利要求4所述的单克隆抗体,其特征在于,所述玉米赤霉烯醇与N,N-二甲基甲酰的质量体积比为1∶(90-110)mg/μL;所述玉米赤霉烯醇与N,N-羰基二咪唑的质量比为1∶(3-5)。
6.根据权利要求4所述的单克隆抗体,其特征在于,所述载体蛋白与玉米赤霉烯醇的质量比为(7-15)∶1;所述载体蛋白与缓冲液的质量体积比为50∶(2-4)mg/ml。
7.根据权利要求4所述的单克隆抗体,其特征在于,所述步骤(b)和(d)中,反应温度为23-27℃,摇晃速度为160-200rpm;所述步骤(b)中的反应时间为2.5-3.5h;所述步骤(d)中的反应时间为1.5-2.5h。
8.权利要求1-7任一所述的单克隆抗体在玉米赤霉烯酮检测中的应用。
9.一种检测玉米赤霉烯酮的酶联免疫试剂盒,其特征在于,包括权利要求1-3任一所述的单克隆抗体。
10.一种检测玉米赤霉烯酮的胶体金检测卡,其特征在于,所述胶体金检测卡包括胶体金标记的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体,所述抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体为权利要求1-7任一所述的单克隆抗体。
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