[发明专利]一种检测微小残留白血病相关融合基因的引物、探针及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的核苷酸序列如SEQ ID No：1～7所示。

2.根据权利要求1所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的核苷酸序列为：

(1)用于检测BCR-ABL1 e13a2或e14a2融合基因的引物和探针为：由SEQ ID No：1所示的正向引物BCR-F1，由SEQ ID No：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQ ID No：6所示的探针P2，其中SEQ ID No：6所示的核苷酸序列的5'端有FAM标记，3'端有BHQ-MGB标记；

(2)用于检测BCR-ABL1 e1a2融合基因的引物和探针为：由SEQ ID No：2所示的正向引物BCR-F2，由SEQ ID No：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQ ID No：6所示的探针P2，其中SEQID No：6所示的核苷酸序列的5'端有FAM标记，3'端有BHQ-MGB标记；

(3)用于检测BCR-ABL1 e19a2融合基因的引物和探针为：由SEQ ID No：3所示的正向引物BCR-F3，由SEQ ID No：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQ ID No：6所示的探针P2，其中SEQID No：6所示的核苷酸序列的5'端有FAM标记，3'端有BHQ-MGB标记；

(4)用于检测ABL1自对照基因的引物和探针为：由SEQ ID No：4所示的正向引物ABL1-F，由SEQ ID No：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQ ID No：7所示的探针P1，其中SEQ ID No：7所示的核苷酸序列的5'端有HEX标记，3'端有BHQ-MGB标记。

3.一种含有权利要求1或2任一权利要求所述检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括核酸扩增试剂，所述的核酸扩增试剂包括：

(1)检测BCR-ABL1 e13a2或e14a2融合基因和BCR-ABL1 e1a2融合基因和BCR-ABL1e19a2融合基因的数字PCR反应液，组份中的主要成份为正向引物BCR-F1、BCR-F2、BCR-F3、ABL1-F，反向引物ABL1-R，探针P1、P2以及ddH₂O；

(2)数字PCR预混液，组份中的主要成份为qScript^TMXLT One-Step RT-qPCR ToughMix，荧光素钠盐，以及ddH₂O。

4.根据权利要求3所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的内参为自对照ABL1基因为：由SEQ ID No：4所示的正向引物ABL1-F，由SEQ ID No：5所示的反向引物ABL1-R，由SEQ ID No：7所示的探针P1，其中SEQ IDNo：7所示的核苷酸序列的5'端有HEX标记，3'端有BHQ-MGB标记。

5.根据权利要求3所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括质控品，所述质控品有阴性质控品和阳性质控品组成，所述的阴性质控品为ddH₂O，所述的阳性质控品为质粒DNA混合液。

6.根据权利要求3所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，检测BCR-ABL1 e13a2或e14a2融合基因和BCR-ABL1 e1a2融合基因和BCR-ABL1e19a2融合基因的数字PCR反应液中含有：10μmol/L的SEQ ID No：1～5各1μL；10μmol/L的SEQ ID No：6～7各0.5μL。

7.根据权利要求3所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，

8.根据权利要求7所述的检测微小残留白血病相关融合基因的引物和探针的试剂盒，其特征在于，所述的微小残留白血病阳性质控中含有5种质粒的混合液，所述质粒DNA如下：BCR-ABL1-e13a2质粒DNA、BCR-ABL1-e14a2质粒DNA、BCR-ABL1-e1a2质粒DNA、BCR-ABL1-e19a2质粒DNA、ABL1自对照质粒DNA。