[发明专利]ANGPTL5基因作为牛背膘厚分子标记及检测方法

权利要求书

1.ANGPTL5基因的单核苷酸多态性位点作为中国西门塔尔牛背膘厚分子标记物的用途，其特征在于，该基因的单核苷酸多态性位点包括：

1）牛ANGPTL5基因的第1内含子的SNP1-I1-1776GA单核苷酸多态性位点；

2）牛ANGPTL5基因的第2内含子SNP2-I2-77TC单核苷酸多态性位点；

3）牛ANGPTL5基因的第2内含子SNP2-I2-1391CT单核苷酸多态性位点；

4）牛ANGPTL5基因的第2内含子SNP2-I2-1505AT单核苷酸多态性位点。

2.权利要求1中所述的ANGPTL5基因单核苷酸多态性位点用于检测中国西门塔尔牛背膘厚的检测方法，其特征在于根据牛ANGPTL5基因序列设计的2对引物如下：

ANGPTL5-1S：５’GAATGTCCTGCTGGCATAGAA３’；

ANGPTL5-1AS：５’TGAGAATTACTGTGCTGCTACT３’；

ANGPTL5-2S：５’ATGGGTGTATATGCTTGTGTGT３’；

ANGPTL5-2AS：５’GCAACTTTCTAACAGCATTCAC３’。

3.根据权利要求2所述的检测方法，包括以下步骤：

1）采集需要检测的牛的全血或组织样品，用牛的全血或组织样品进行基因组DNA提取；

2）根据权利要求2设计引物；

3）PCR混池扩增产物测序，用所提取的全基因组DNA和权利要求2中的引物，分别进行PCR扩增，PCR反应程序为：95℃预变性5 min，95℃变性30 s，退火30 s，72℃延伸1 min，循环35次；延伸72℃ 10 min；16℃保存，备用；PCR反应体系：Taq PCR Mix 10 μL，步骤2)的上游/下游引物各 0.5 μL，DNA混池/个体DNA 2 μL，去离子水7 μL，共20 μL体系用于PCR；获得PCR扩增产物1和PCR扩增产物2，送至测序公司测序，采用Seqman软件进行测序结果分析，找出权利要求1所述的分子标记位置，对检测的牛样品进行基因型分析；

4）权利要求1中涉及的4个SNPs位点的基因型检测和预测牛背膘厚性状；

其中，拥有I1-1776GA位点的GA基因型，I2-77TC的TC基因型，I2-1391CT的TC基因型和I2-1505AT的AT基因型的个体具有显著高于其它基因型牛的背膘厚。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：该基因的单核苷酸多态性位点4个SNPs中，I1-1776GA与I2-77TC强连锁，I1-1776GA与I2-1391CT强连锁，I1-1776GA与I2-1505AT强连锁，I2-77TC与I2-1391CT强连锁，I2-77TC与I2-1505AT强连锁，I2-1391CT与I2-1505AT强连锁，4个SNPs形成了两个单倍型，分别为ACTT和GTCA；所述的4个SNPs位点以及这4个位点形成的2种单倍型均可作为肉牛背膘厚的分子育种和标记辅助选择标记。