[发明专利]一种枪头式分散固相微萃取柱、基于该枪头式分散固相微萃取柱的纯化方法及应用

权利要求书

1.一种枪头式分散固相微萃取柱，其特征在于：包括锥形移液管和连接管，所述锥形移液管和连接管为一整体成型件，在锥形移液管的尖头端和连接管的上端分别设置有可脱卸的保护帽体，所述锥形移液管的尖头管口处设置有过滤层，所述过滤层具有能够使液体试样通过的孔或孔隙结构；所述过滤层的上方为填料层，所述填料层为堆积在所述过滤层上方的松散的湿性填料；所述湿性填料上方为湍流室，所述湍流室上部设置有透气挡板；所述液体试样由下而上经所述过滤层过滤将湿性填料冲散，裹挟着湿性填料的液体试样冲入倒锥形的湍流室完成亲和吸附；所述连接管位于移液管的上端，所述连接管作为密封接头，所述连接管具有光滑的内壁。

2.根据权利要求1所述的枪头式分散固相微萃取柱，其特征在于：所述填料层上方设置有分散环，所述分散环为能够在湍流室内上下自由浮动，当液体试样或气体从下端吸入时，分散环会随之上下浮动，和填料反复接触，促进填料在湍流室内湍流混合；或所述分散环为设置在锥形移液管内壁的突出环，或所述分散环为带有分配孔的网孔结构。

3.根据权利要求1所述的枪头式分散固相微萃取柱，其特征在于：所述过滤层选自多孔玻璃、多孔氧化物、玻璃纤维、多孔高分子或金属网中的一种或几种的混合。

4.根据权利要求1所述的枪头式分散固相微萃取柱，其特征在于：所述湿性填料的体积占移液管体积的0.3％～15％。

5.一种基于权利要求1所述的枪头式分散固相微萃取柱的纯化方法，其特征在于：包括如下步骤，

A)预处理：吸打结合缓冲液，重复数次；

B)抗体吸附：吸打溶于结合缓冲液中的抗体样品，重复数次；

C)洗涤：吸打结合缓冲液，重复数次，洗涤可一步或分步完成；

D)抗体洗脱：吸打洗脱缓冲液，重复数次。

6.一种根据权利要求5所述纯化方法的应用，其特征在于：包括如下步骤

(1)枪头式分散固相微萃取柱规格选择：采用IMtips^TM Protein A枪头式分散固相微萃取柱，内含GE Life Sciences Protein A MabSelect SuRe^TM LX树脂作为湿性填料；PBS缓冲液组成：磷酸钠，氯化钠，pH 7±0.5；

(2)样品处理：将CHO细胞培养液离心，取上清液作为样品溶液；

(3)预处理：取出IMtips^TM Protein A枪头式分散固相微萃取柱，与移液器紧密结合后，吸入PBS缓冲液，吸液过程中使微萃取柱中Protein A树脂充分重悬，打出液体，如此反复吸打次，最后排空弃掉全部的PBS；

(4)抗体吸附：用步骤(3)中预处理后的萃取柱吸入步骤(2)中准备的样品溶液，一次吸入，吸液过程中使微萃取柱中Protein A树脂充分重悬，打出液体，如此反复吸打次，最后排空；

(5)洗涤1：继续吸入PBS缓冲液、NaCl结合缓冲液，吸液过程中使微萃取柱中Protein A树脂充分重悬，打出液体，如此反复吸打数次，最后排空弃掉结合缓冲液；

(6)洗涤2：继续吸入PBS缓冲液，吸液过程中使微萃取柱中Protein A树脂充分重悬，打出液体，如此反复吸打数次，最后排空弃掉全部PBS；

(7)抗体洗脱1：最后一次或分多次吸入柠檬酸钠洗脱液，吸液过程中使微萃取柱中Protein A树脂充分重悬，打出液体，如此反复吸打数次，最后将液体排出到干净的样品管中，即为纯化得到的抗体溶液。