[发明专利]正交试验优化清咽润喉制剂的提取工艺

权利要求书

1.正交试验优化清咽润喉制剂的提取工艺，其特征在于：以提取液中没食子酸、东莨菪内酯、滨蒿内酯、荷叶碱含量和出膏率的综合加权评分为评价指标，采用L₉（3⁴）正交试验，以乙醇浓度、料液比、提取次数、提取时间为考察因素，优化清咽润喉制剂的提取工艺并进行工艺验证；

对于青果中没食子酸、东莨菪内酯、滨蒿内酯含量的测量方法包括以下步骤，

S1、供试品溶液的粗加工：称取10.0g青果粗粉、10.0g荷叶细丝和10.0g鲜莱菔小丁，置于1000ml圆底烧瓶中，加10倍量纯度为75%乙醇，提取1h，共提2次，随后取出，过滤，摇匀；

S2、供试品溶液的精加工：取10ml粗加工滤液，经旋转蒸发仪挥干，随后用10ml甲醇超声溶解，置于10ml棕色容量瓶内，加甲醇定容至刻度线，振摇均匀，取过0.22 μm微孔滤膜的续滤液，即为供试品溶液；

S3、提取对照组溶液，精密称取2.00mg没食子酸对照品于10ml棕色容量瓶内，加入甲醇，使之溶解，并定容至刻度线，振摇均匀；随后精密称取1.00mg东莨菪内酯对照品和1.00mg滨蒿内酯对照品置于同一个25ml棕色容量瓶内，加入甲醇溶解，定容至刻度线，振摇均匀；从中精密移取1ml东莨菪内酯和滨蒿内酯混合对照品溶液于25ml容量瓶内，加甲醇定容至刻度线，振摇均匀；最后移取上述没食子酸对照品3ml、东莨菪内酯和滨蒿内酯混合对照品5ml于10ml棕色容量瓶内，加入甲醇，定容至刻度线；即得没食子酸浓度为0.06000mg·ml^-1、东莨菪内酯浓度为0.00800mg·ml^-1、滨蒿内酯浓度为0.00800mg·ml^-1的混合对照品溶液暂储于冰箱内，备用；

S4、利用SHIMADZU Shim-pack GIST C18柱：4.6mm×250mm,5μm制作色谱；色谱条件如下，流动相：乙腈-0.5%冰乙酸水溶液，梯度洗脱：0～5min，2.5 %乙腈；5～21min，3 %～27%乙腈；21～30min，27 %～35%；30～32min，3.5 %～2.5%乙腈；32～37min，2.5 %乙腈；检测波长：271 nm和345nm；柱温：30℃；流速：1.0 ml·min^-1；进样量：10μl；

S5、标准曲线绘制根据S3中的色谱图取上述混合对照品溶液，分别进样2、4、6、8、10和12μl，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得到3个混合对照品的回归方程；

荷叶中荷叶碱含量检测包括以下步骤，

S1、供试品溶液的粗加工，称取10.0g青果粗粉、10.0g荷叶细丝、10.0g鲜莱菔小丁，置于1000ml圆底烧瓶中，加10倍量75%乙醇，提取1h，共2次；

S2、供试品的精加工，取出，过滤，振摇均匀，取过μm微孔滤膜的续滤液，即为供试品溶液；

S3、对照品溶液的制备，精密称取2.61mg荷叶碱对照品，置于25ml棕色容量瓶内，加入甲醇，使对照品溶解，并定容至刻度线，倒转摇匀，从上述容量瓶中精密移取1ml对照品溶液，置于10ml容量瓶内，定容至刻度线，即得浓度为0.01044mg·ml^-1荷叶碱对照品溶液，暂储于冰箱内，备用；

S4、SHIMADZU Shim-pack GIST C18柱：4.6 mm× 250mm,5μm；流动相：乙腈-0.1 %三乙胺溶液为60:40；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；流速：0.8 ml•min^-1；进样量： 10μl；

S5、标准曲线绘制，取上述荷叶碱对照品溶液，分别进样2、6、10、14、18和22μl，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标。

2.根据权利要求1所述的正交试验优化清咽润喉制剂的提取工艺，其特征在于：以青果中没食子酸含量、东莨菪内酯含量、滨蒿内酯含量，荷叶中荷叶碱含量和出膏率作为考察指标，采用综合评分的方法，其中综合评分=没食子酸ⅰ/没食子酸max×30%×100+东莨菪内酯ⅰ/东莨菪内酯max×20%×100+滨蒿内酯ⅰ/滨蒿内酯max×20%×100+荷叶碱ⅰ/荷叶碱max×20%×100+干膏率ⅰ/干膏率max×10%×100。