[发明专利]一种人外周血淋巴细胞的检测方法在审
| 申请号： | 201910671950.X | 申请日： | 2019-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN110487706A | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 何淼;李国平;张涛 | 申请（专利权）人： | 泛肽生物科技(浙江)有限公司 |
| 主分类号： | G01N15/14 | 分类号： | G01N15/14;G01N33/577 |
| 代理公司： | 33246 浙江千克知识产权代理有限公司 | 代理人： | 李欣玮<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 315000 浙江省宁波市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人外周血淋巴细胞 单克隆抗体 人外周血 荧光探针 多指标 工作液 溶血素 外周血 检测 人抗 亚群 样本 输出 保存 | ||
1.一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)T淋巴细胞亚群检测：
取人抗凝外周血加入流式管底部，加入抗人CD3、CD4、CD8、CD45单克隆抗体，涡旋混匀，室温下避光孵育；然后进一步加入包含荧光探针的溶血素工作液，涡旋混匀，室温下避光孵育；最后使用流式细胞仪进行检测，获得人外周血T淋巴细胞亚群百分比和绝对计数值；
(2)NK淋巴细胞亚群检测：
取人抗凝外周血加入流式管底部，加入抗人CD3、CD56、CD16、CD45单克隆抗体，涡旋混匀，室温下避光孵育；然后进一步加入包含荧光探针的溶血素工作液，涡旋混匀，室温下避光孵育；最后使用流式细胞仪进行检测，获得人外周血NK淋巴细胞亚群百分比和绝对计数值。
2.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)的荧光探针为线粒体荧光探针；优选的，所述荧光探针为线粒体绿色荧光探针。
3.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)的荧光探针为溶酶体荧光探针；优选的，所述荧光探针为溶酶体绿色荧光探针。
4.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述单克隆抗体与荧光探针的体积比为5:1～10:1。
5.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述溶血素工作液包含氯化铵、碳酸氢钾、EDTA二钠和胎牛血清(FBS)。
6.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，每升所述溶血素工作液包含氯化铵75～85g、碳酸氢钾15～25g、EDTA二钠300～400mg、胎牛血清(FBS)15～30ml。
7.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述溶血素工作液中荧光探针的体积浓度为2％～5％。
8.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，人抗凝外周血与溶血素工作液的体积比为1:10～1:5。
9.根据权利要求1的一种人外周血淋巴细胞的检测方法，其特征在于，所述避光孵育时间为15-60分钟。
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