[发明专利]柯萨奇病毒A10型假病毒的包装及血清中和抗体检测方法在审
| 申请号： | 201910672658.X | 申请日： | 2019-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN110452921A | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 李克雷;董方玉;吴星;梁争论;崔力沙;孙世洋;崔博沛;毛群颖;高帆;卞莲莲;马超 | 申请（专利权）人： | 中国食品药品检定研究院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/65;C12N15/41;C12N7/01;C07K16/10 |
| 代理公司： | 11616 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘晓明<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 假病毒 重组表达质粒 柯萨奇病毒 基因序列 结构蛋白 中和抗体 绿色荧光蛋白基因 绿色荧光蛋白 血清中和抗体 蛋白酶 亚基因组RNA 核苷酸序列 转录 安全问题 酶切位点 设计引物 质粒表达 重组质粒 单周期 复制子 活病毒 试剂盒 检测 拼接 质粒 灵敏 组装 感染 安全 | ||
1.一种用于包装柯萨奇病毒A10型假病毒的重组表达质粒，其特征在于：所述重组表达质粒命名为CA10-EGFP-CAPSID质粒，所述重组表达质粒具有序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的重组表达质粒，其特征在于：所述重组质粒使用绿色荧光蛋白报告基因(EGFP)，在绿色荧光蛋白基因和2A酶切位点后为CA10所有结构蛋白的编码基因(P1基因)。
3.根据权利要求1所述的重组表达质粒，其特征在于：在EGFP和P1基因片段之间添加蛋白酶切位点(2A酶切位点，-AITTL-)。
4.一种表达权利要求1所述的重组质粒的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)将绿色荧光蛋白的基因序列与CA10所有结构蛋白的基因序列拼接；2)并将2A蛋白酶的酶切位点插入绿色荧光蛋白基因的前段；3)设计引物；
所述引物序列为：
CA10-EGFP-F ACCCAAGCTGGCTAGCGCCACCATGGTGAGCAAGGGCG
CA10-EGFP-R gacttgagctccAAGGGTAGTAATGGCCTTGTAC
CA10-P1-F GCCATTACTACCCTTGGAGCTCAAGTCTCGACGCAAAAATCC
CA10-P1-R GGTGATGATGaccggtTAACATATTAGCTTGCTTGATACTGGATCG。
5.一种假病毒，其特征在于：由CA10-EGFP-CAPSID质粒表达的柯萨奇病毒A10结构蛋白和EV71-LUC-REPLICON复制子转录的EV71亚基因组RNA组装而成。
6.一种包含权利要求5所述假病毒的中和抗体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒体用于体外检测肠道柯萨奇病毒A10。
7.一种检测柯萨奇病毒A10中和抗体的检测方法，其特征在于：包含以下步骤：1)将所述假病毒与系列稀释的待测抗体样品混合，得到混合物；2)用所述混合物感染CV-A10敏感的细胞，根据敏感的细胞中报告基因的表达物所产生的信号定性或定量检测待测样品中CV-A10特异性中和抗体的效价。
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