[发明专利]一步法检测噻虫嗪残留的scFv-ELISA试剂盒及其应用

权利要求书

1.抗噻虫嗪禽源scFv-AP基因工程抗体制备，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.一步法检测噻虫嗪残留的scFv-ELISA试剂盒，包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及设在盒体内的试剂，其特征在于，所述酶标板的每个孔包被有噻虫嗪包被抗原，所述试剂包括权利要求1所述的抗噻虫嗪禽源scFv-AP基因工程抗体、噻虫嗪标准溶液、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述噻虫嗪包被抗原制备方法如下：

(1)称取8.269mg 3-[2-(2-丁硫羧基)-5-亚甲基]-5-甲基-4-亚硝基-1,3,5-噁二嗪(噻虫嗪-5C，化学结构式如图2所示)、2.76mg NHS、4.738mg DCC溶于200μL无水DMF中，然后将其放置于磁力搅拌器上，室温下搅拌反应过夜，次日将反应溶液在5000rmp条件下离心15min，上清液即为活性酯溶液。

(2)称20mg BSA溶于2mL的CB(0.05M，pH 9.6)中，将其置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，逐滴缓慢滴加上述活性酯溶液，约20min加完，然后室温下继续搅拌反应6h。

(3)反应液使用PBS透析5-6次，6h换一次PBS，离心收集上清液，上清液即为合成的噻虫嗪包被抗原Thi-5C-BSA。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96孔酶标板，所述包被抗原的包被浓度为1.11μg/mL。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗噻虫嗪禽源scFv-AP基因工程抗体的浓度为1.00μg/mL。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述显色液由甘氨酸7.51g、MgCl₂·6H₂O0.203g、ZnCl₂ 0.136g、对硝基苯磷酸二钠1g和蒸馏水1000mL配制而成，pH值10.4。

7.根据权利要求2-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述反应终止液为3M的氢氧化钠。

8.噻虫嗪scFv-ELISA检测试剂，其有效成分为权利要求1所述抗噻虫嗪禽源scFv-AP基因工程抗体。

9.权利要求2-7任一项所述试剂盒或权利要求8所述检测试剂在ELISA法检测样品中噻虫嗪残留中的应用。