[发明专利]一种胶体金标记的抗HE4抗体试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种胶体金标记的抗HE4抗体试剂盒，所述的试剂盒由PVC底板（1）、样品垫（2）、结合垫（3）、反应垫（4）和吸水垫（5）组成，所述样品垫（2）、结合垫（3）、反应垫（4）和吸水垫（5）依次搭接在PVC底板1上，其特征在于：所述的反应垫（4）上设置有包被有抗HE4抗体的检测线（41）、包被有羊抗鼠IgG的质控线（42）；所述的样品垫（2）经样品垫处理液处理，所述的样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、蔗糖、牛血清白蛋白、氯化钠和吐温组成；其中，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2，所述蔗糖的质量终浓度为3%，氯化钠的浓度为300mM，所述的牛血清白蛋白的体积终浓度为2%，吐温的体积终浓度为0.5 %，所述的磷酸盐缓冲液中Na₂HPO₄·12H₂O的质量含量为0.26%，NaH₂PO₄·2H₂O的质量含量为0.044%；所述的胶体金与抗HE4抗体偶联的复合物经重悬液悬浮固化于结合垫（3）上，所述重悬液由磷酸盐缓冲液、惰性蛋白、糖类和吐温组成，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为6.0-9.0；所述惰性蛋白选自牛血清白蛋白、酪蛋白和鸡卵清白蛋白中的一种；所述糖类选自单糖、双糖或多糖中的一种。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L，pH为7.2；所述惰性蛋白为牛血清白蛋白，质量终浓度为0.1%-4%；所述糖类为蔗糖和海藻糖；所述的吐温质量终浓度为2%。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液中，Na₂HPO₄·12H₂O的质量含量为0.26%，NaH₂PO₄·2H₂O的质量含量为0.044%；所述的牛血清白蛋白质量终浓度为1.5%，所述糖类为质量终浓度为3%蔗糖和质量终浓度为3%海藻糖。

4.一种如权利要求1所述的抗HE4抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)胶体金的制备

取超纯水于锥形瓶中并放入洁净转子，加热至有气泡均匀冒出时，加入1mL 1% 氯金酸溶液，加热至沸腾后立即加入1mL 1.5%柠檬酸三钠，此时锥形瓶中溶液的颜色由灰黑色转变为酒红色，继续加热7 min，取下锥形瓶，室温冷却，定容至100 mL，密封备用；

(2)抗体标记

取1mL步骤(1)制备得到的胶体金，加入10μL浓度为0.1mol/L的碳酸钾溶液，调节体系的pH值为8.0；再加入3μL的2mg/mL的Anti-HE4-Ab1，室温混合；

(3)封闭

向步骤(2)中胶体金标记的Anti-HE4-Ab1中加入牛血清白蛋白溶液，控制牛血清白蛋白的质量终浓度为1%，室温混匀30min；

(4)重悬

封闭后的胶体金标记抗体离心，弃去上清，沉淀用重悬液重悬；所述重悬液由磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和吐温组成，余量为水，其中磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L，pH为7.2；牛血清白蛋白质量终浓度为1.5%，蔗糖质量终浓度为3%，海藻糖质量终浓度为3%，吐温的质量终浓度为2%；磷酸盐缓冲液中，Na₂HPO₄·12H₂O质量含量为0.26%，NaH₂PO₄·2H₂O质量含量为0.044%；

(5)制备样品垫

把GF-06玻璃纤维膜裁剪成220mm×100mm，浸泡在样品垫处理液中，干燥，取出即得样品垫，放入自封袋中备用；样品垫处理液由磷酸盐缓冲液、蔗糖、氯化钠、牛血清白蛋白和吐温组成，其中，磷酸盐缓冲液的浓度为0 .01mol/L，pH为7.2，蔗糖质量终浓度为3%，氯化钠浓度为300mM，牛血清白蛋白的体积终浓度为2%，吐温的质量终浓度为0.5%，磷酸盐缓冲液中Na₂HPO₄·12H₂O的质量含量为0.26%，NaH₂PO₄·2H₂O的质量含量为0.044%，余量为水；

(6)制备结合垫

将步骤(2)胶体金标记的Anti-HE4-Ab1均匀的铺在GF-06玻璃纤维膜上，干燥，使标记抗体的胶体金粒子固化在玻璃纤维膜上即得结合垫，取出放入密封袋，加入干燥剂，密封保存；

(7)制备反应垫

将硝酸纤维素膜贴在PVC板上，然后用0.01mol/L，pH为7.2的PBS把Anti-HE4-Ab2稀释至浓度为2mg/mL，作为检测线包被原；把羊抗鼠IgG稀释为1mg/mL，作为质控线C包被原；用喷金划膜仪以1μL/cm划膜，置于37℃鼓风干燥6h即得反应垫，取出放入密封袋，备用；

(8)试剂盒组装

将结合垫贴在反应垫的前端，再将样品垫贴在结合垫的前端，最后将吸水纸的前端贴在反应垫的后端，另一端贴在PVC板的末端，即完成试剂盒的组装，可得HE4快速检测试剂盒。