[发明专利]一种胶体金标记的抗HE4抗体试剂盒及其制备方法

说明书

本发明属于生物学免疫层析检测方法领域，具体涉及一种胶体金标记的抗HE4抗体试剂盒及其制备方法。所述的试剂盒由样品垫、结合垫、反应垫、吸水垫和PVC底板组成；所述的反应垫上有包被有鼠源抗HE4抗体的检测线T以及包被有羊抗鼠IgG的质控线C；通过观察检测线的显色反应即可实现卵巢癌的床旁快速筛查诊断。本发明制备的胶体金免疫层析试剂盒假阳性率低、灵敏快速、稳定性好、结果易判，能够满足卵巢癌标志物HE4的快速筛查需求。

技术领域

本发明属于生物学免疫层析检测方法领域，具体涉及一种胶体金标记的抗HE4抗体试剂盒及其制备方法。

背景技术

卵巢癌是一种妇科常见的恶性肿瘤，其死亡率居所有妇科恶性肿瘤之首，严重危害女性健康。由于卵巢癌早期通常无明显症状且缺乏简便有效的早期诊断方法，因出现症状就诊时约70％的患者已为晚期，晚期患者的且5年生存率为20％-30％，而早期患者的5年生存率为70-90％。因此，卵巢癌的早期检出对其治疗方案的选择及改善患者预后有重要作用。

目前，临床上常用的卵巢癌早期检测方法主要有妇科检查、影像学检查和肿瘤标志物检测等。这些方法及相互配合使用时虽然能够对卵巢癌进行准确诊断，但是对设备和操作人员要求较高，提高了检测成本，同时阻碍了卵巢癌早期检测的普及和推广。肿瘤标志物的检测被广泛用于肿瘤早期筛查，糖类抗原125(carbohydrate antigen125，CA125)是卵巢癌诊断中常用的肿瘤标志物，但是其用于卵巢癌诊断时的特异性较低，易出现假阳性等问题，因而需要找到一种新的肿瘤标志物来取代它或与其实现互补。人附睾蛋白4(humanepididymis secretory protein 4，HE4)是一种仅在卵巢癌组织中高表达，在其他正常组织中不表达或低表达的新型卵巢癌标志物，其用于卵巢癌的早期诊断的特异性和灵敏度均优于CA125。HE4由卵巢癌细胞分泌，分子量为25Kda，分子量较小，所以在卵巢癌早期容易分泌到血液中。HE4具有在不同病理类型的卵巢癌中差异化表达的特点，其在子宫内膜样卵巢癌中完全表达，黏液性卵巢癌中基本不表达，而在透明细胞癌和黏液性卵巢癌中表达率均较低，但明显高于卵巢良性肿瘤组织和正常组织。HE4是早期卵巢癌诊断中特异性最高、鉴别诊断最佳的肿瘤标志物，其与CA125联合使用时，敏感性变化不大，但会进一步提升对卵巢癌诊断的特异性，更有助于卵巢癌的早期检出。HE4作为一种小分子分泌蛋白，其可以在人血液中检测到，并且其比CA125释放更早且不受女性绝经状态等因素的影响，可广泛用于卵巢癌的早期诊断、预后评估和复发监测等方面。

另外，近年研究发现HE4在乳腺癌组织中也存在高表达，这表明HE4可能是检测乳腺癌一个理想的肿瘤标志物。人附睾蛋白4(HE4)是在1991年由Kirchhoff等学者发现的一种富含半胱氨酸的分泌性糖蛋白，已先后发现其在卵巢癌、肺癌等恶性肿瘤中均存在高表达且在肿瘤早期就能检测到。其表达与乳腺癌患者的淋巴结转移相关并可能是乳腺癌复发的一个预测因素，HE4在相关肿瘤血清学诊断上具有较高的灵敏度和特异性，能较好地对乳腺癌进行早期检测筛查对于乳腺癌的发生、发展、治疗及预后具有重要临床意义。

目前，HE4常通过全自动化学发光免疫分析仪和酶联免疫吸附法试剂盒等进行定量检测，但是由于此类方法需要借助大型仪器设备且价格较高，一般在医院和中心实验室进行，难以作为普通人群的快速筛查手段。侧向层析技术具有快速、经济、准确、简便等优势已被广泛用于疾病标志物等方面的及时检测和家庭自检中。胶体金是目前制备侧向层析试剂盒时最常的标记探针，其制备工艺成熟、性能稳定，生物相容性好，能与蛋白、核酸等结合，可广泛用于疾病诊断等领域的快速检测，并且已有相关成品试剂盒走进家庭。但是，由于全血或者血清样本复杂，检测相对比较困难且容易产生假阳性，目前供家庭使用的侧向层析试剂盒通常仅用于检测尿液或者唾液样本。

因此，简化血液样本的前处理步骤，降低试剂盒假阳性率则成了目前亟待解决的难题。本试剂盒利用侧向层析技术，通过对样品垫处理液的优化研制出一种操作简便，快速准确、成本经济适用于家庭自检的卵巢癌早期检测试剂盒，不仅可以简化了血液样品的处理步骤及降低假阳性率，而且对卵巢癌的早期筛查、复发监测和提高患者生存率具有重要意义。

发明内容