[发明专利]用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂

权利要求书

1.用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂，其为一种存在于水性载体液中的充气微泡悬浮液，其中的微泡与链霉亲和素偶联，微泡直径大小在0.2-10μm范围内，每1mL充气微泡悬浮液中包含0.5～200×10^8个微泡的链霉亲和素偶联微泡，每1mL充气微泡悬浮液中微泡内的包埋气体量为1～200ug。

2.根据权利要求1的液体制剂，其特征在于：

所述微泡直径大小在1-10μm范围内；

其每1mL充气微泡悬浮液中包含1～150×10^8个微泡的链霉亲和素偶联微泡；

其每1mL充气微泡悬浮液中包含1～100×10^8个微泡的链霉亲和素偶联微泡；

其每1mL充气微泡悬浮液中微泡内的包埋气体量为5～150ug；和/或

其每1mL充气微泡悬浮液中微泡内的包埋气体量为10～100ug。

3.根据权利要求1的液体制剂，其特征在于：所述包埋气体选自C3F8、SF6、CF4、氟利昂、N2、CO2、O2、空气，尤其是选自C3F8、SF6、CF4。

4.根据权利要求1的液体制剂，其特征在于：

所述微泡是由选自下列的材料构成：磷脂、分子量2000～6000的聚乙二醇、脂肪酸；

所述微泡是由选自下列的材料构成：磷脂10重量份、分子量2000～6000的聚乙二醇200～2000重量份、脂肪酸0.2～5重量份；

所述微泡是由选自下列的材料构成：磷脂10重量份、分子量2000～6000的聚乙二醇250～1500重量份、脂肪酸0.25～2.5重量份；

所述微泡是由选自下列的材料构成：磷脂10重量份、分子量2000～6000的聚乙二醇500～1000重量份、脂肪酸0.5～2重量份；

所述微泡是由选自下列的材料构成：磷脂10重量份、分子量2000～6000的聚乙二醇600～800重量份、脂肪酸0.75～1.5重量份；和/或

所述聚乙二醇的分子量为3000～5000，例如所述聚乙二醇是聚乙二醇4000。

5.根据权利要求1的液体制剂，其特征在于：

所述水性载体液选自：水、0.9％氯化钠溶液、5％葡萄糖溶液，优先的是0.9％氯化钠溶液；

其每1ml中包含的磷脂为10～200ug，例如为20～150ug，例如为50～100ug；和/或

所述磷脂选自：卵磷脂类例如磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、心磷脂和神经鞘磷脂，例如是二花生酰磷脂酰胆碱(DAPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC，1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)、二棕榈酰磷脂酰甘油(酸型，DPPG)或其钠盐(DPPG-Na，1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-rac-glycerol sodium(DPPG-Na))、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)。

6.根据权利要求1的液体制剂，所述磷脂是DSPC和DPPG-Na二者；例如DSPC和DPPG-Na二者以重量比1：0.2～5的组合，例如DSPC和DPPG-Na二者以重量比1：0.5～2的组合，例如DSPC和DPPG-Na二者以重量比1：1的组合。

7.根据权利要求1的液体制剂，所述微泡上偶联有链霉亲和素，磷脂与链霉亲和素的重量比为100：0.01～0.2。

8.根据权利要求1的液体制剂，所述脂肪酸选自棕榈酸、硬脂酸、油酸。

9.权利要求1-9任一项所述链霉亲和素偶联微泡的液体制剂，其是通过如下方式制备得到：取本发明第三方面任一项所述用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的冻干制剂，通过注射器穿刺胶塞向玻璃瓶内注入水性载体液，剧烈振荡使玻璃瓶内容物溶解、混悬，即得充气微泡悬浮液即链霉亲和素偶联微泡的液体制剂。

10.权利要求1-9任一项所述链霉亲和素偶联微泡的液体制剂在从外周血中分离目标细胞的方法中作为分离试剂的用途，所述从外周血中分离目标细胞的方法，包括如下步骤：

(1)将预先用抗凝剂经抗凝处理的外周血置于试管内，添加用生物素标记的目标细胞特异性抗体，混合均匀，孵育，使得目标细胞被特异性抗体标记；

(2)接着向试管内添加链霉亲和素偶联微泡，混合均匀，孵育，使目标细胞进一步被微泡标记，添加磷酸盐缓冲液稀释；

(3)将试管离心使目标细胞分离，结合了特异性抗体和微泡的目标细胞浮于液体上层，而非目标细胞沉于下部；

(4)吸取包含目标细胞的上层液体，即得目标细胞；

该从外周血中分离目标细胞的方法进一步的如说明书第一方面任一实施方案所述。