[发明专利]用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂

说明书

本发明涉及用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂，其为一种存在于水性载体液中的充气微泡悬浮液，其中的微泡与链霉亲和素偶联，微泡直径小于10μm，每1mL充气微泡悬浮液多达10^8个微泡的链霉亲和素偶联微泡，每1mL充气微泡悬浮液中微泡内的包埋气体量为1～200ug。还涉及该液体制剂在从外周血中分离目标细胞的方法中作为分离试剂的用途。液体制剂用于从外周血中分离目标细胞的方法如说明书所详述的，其可从外周血简易、快速、高效地分离获取免疫细胞、造血干细胞等目标细胞，避免现有磁珠法的磁珠残留、流式分选引入荧光素的弊端等问题，不需要昂贵的仪器设备、成本低、并且对所结合的靶细胞毒性极小、不易使之失活；分选出的细胞纯度、活力高。

技术领域

本发明涉及从血液特别是外周血例如全血中简易、快速、高效地分离获取目标细胞例如免疫细胞、造血干细胞等的方法，还涉及分离出的这些目标细胞在治疗疾病中的应用，具体涉及从健康人体的血液中特别是外周血中简易、快速、高效分离免疫细胞的方法。本发明所述目标细胞例如但不限于CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞等T细胞，CD56+细胞等NK细胞，CD19+细胞等B细胞，CD34+细胞等造血干细胞。本发明还特别地涉及用于细胞分选的链霉亲和素偶联微泡的液体制剂。

背景技术

免疫细胞(immune cell)是人体的一类重要细胞，其也俗称白细胞，包括淋巴细胞和各种吞噬细胞，也特指能识别抗原、产生特异性免疫应答的淋巴细胞。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛。研究发现血液中蕴含丰富的淋巴细胞，由于这类细胞具有免疫调控和自我复制等特点，所以一直受到人们的关注。淋巴细胞具有自然杀伤和自我保护的特性，针对病毒、细菌、真菌感染的治疗均起到关键的作用，在癌症的治疗中具有很大的临床应用价值。

免疫细胞在健康人体的血液中蕴含丰富，但由于年龄老化、亚健康、罹患疾病等原因，血液中的免疫细胞数目会显著降低，增殖分化能力亦大幅度衰退；而其他健康人的免疫细胞移植给患者则可能引起免疫排斥反应；提取免疫细胞过程对患者的损伤性和在采集时遇到的其他问题，都直接影响了免疫细胞的临床应用，使得寻找一种稳定可靠的免疫细胞获取来源成为一个重要的问题。

研究显示，健康人的新鲜血液中含有大量有效的免疫细胞并且能有效分离，这种组织来源的免疫细胞不仅保持了免疫细胞的特异性免疫应答的生物学特性，而且分离出来的免疫细胞具有原始的、强劲的增殖能力，同时还易于冷冻保存和复苏。由于免疫细胞起源于自身，大大减低了触发免疫反应及引起移植物抗宿主病的风险。潜伏性病毒和微生物的感染及传播几率比较低。采集过程简单，对健康的被采集者无任何危害及损伤。以上原因足以令从血液中分离免疫细胞成为获得免疫细胞的有效途径。

近些年，随着我们对免疫系统认识不断深入，利用免疫系统的不同组分治疗癌症的免疫疗法的研究取得了重大突破，目前已有一些相关药物通过了美国食品药品管理局的审核并在临床中使用。例如，用抗体治疗乳腺癌、黑色素瘤、淋巴癌、急慢性白血病等；用癌疫苗治疗前列腺癌；用干扰素和IL2等细胞因子增强广泛的免疫应答；多个免疫检查点的抑制剂也已被找到。T细胞作为淋巴细胞的一种，在人体获得性免疫中发挥着至关重要的作用。成熟的T细胞能活化其他免疫细胞，调节免疫功能，识别特异的抗原并杀死受到感染的细胞或者癌细胞。T细胞回输疗法在处理病毒感染病例的实践中由来已久。回输瘤体浸润T细胞疗法在治疗黑色素瘤的临床试验中，证明了T细胞回输针对肿瘤抗原也有一定的疗效。如何利用现有技术快速、高效的从血液中分离出足够用于治疗的T细胞则称为当前肿瘤免疫研究的核心问题和技术难点。

目前关于血液免疫细胞的分离方法不一，且大多步骤复杂，获得较多数量血液免疫细胞也存在一定困难，同时患者在罹患疾病时采集血液存在一定风险。因此，本领域需要有从血液中分离免疫细胞的简单、有效的方法，以满足医药、科研、临床应用等领域的需求。