[发明专利]一种H5亚型禽流感病毒的等温扩增检测方法在审
申请号: | 201910678672.0 | 申请日: | 2019-07-25 |
公开(公告)号: | CN110283943A | 公开(公告)日: | 2019-09-27 |
发明(设计)人: | 王素春;王楷宬;黄保续 | 申请(专利权)人: | 中国动物卫生与流行病学中心 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
代理公司: | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 266032 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 快速检测 传统检测技术 等温扩增检测 现场快速检测 分子生物学 反向引物 复杂仪器 正向引物 高通量 变温 探针 引物 灵敏 束缚 检测 安全 | ||
1.一种检测H5亚型禽流感病毒引物对和探针组,其特征在于,所述的引物对的正向引物的序列为SEQ ID NO:1,反向引物的序列为SEQ ID NO:2,探针的序列为SEQ ID NO:3。
2.如权利要求1所述的引物对和探针组,其特征在于,所述的探针自5′端起第30位碱基T标记FAM发光基团,第30位碱基后连接脱碱基位点四氢呋喃,第31位碱基T标记BHQ1淬灭基团,3′端进行C3-spacer阻断修饰。
3.权利要求1或2所述的引物对和探针组在制备检测H5亚型禽流感病毒的制品中的应用。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述的制品为逆转录重组酶介导等温扩增试剂盒。
5.一种逆转录重组酶介导等温扩增试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒中包含有逆转录重组酶介导等温扩增的试剂,和权利要求1或2所述的引物对和探针组。
6.一种非疾病诊断治疗目的的检测H5亚型禽流感病毒的方法,其特征在于,所述的方法包括如下的步骤:
1)配制RT-RAA反应体系:
其中包含有逆转录重组酶介导等温扩增所使用的试剂组分,以及权利要求1或2所述的引物对和探针组、待检测样品的核苷酸;
2)RT-RAA反应体系扩增
将检测反应条件设置为在39℃下恒温扩增20min;
3)结果判定
质控标准:阴性对照无扩增曲线,且阳性对照出现扩增曲线,待检测样品的无扩增曲线,样品判为阴性;出现扩增曲线,样品判为阳性。
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