[发明专利]一种ACE抑制肽、制备方法及用途

说明书

本发明公开了一种ACE抑制肽、制备方法及用途。所述ACE抑制肽的氨基酸序列为GPPGP，来源于天然动物蛋白，其IC₅₀为190.43μmol/L，分子量小，具有稳定、安全、人体易吸收等特点，同时能进行产业化生产。氨基酸序列为GPPGP的ACE抑制肽，可用于制备高血压治疗/预防药物，或作为功能食品添加剂，供高血压患者长期治疗保健使用。

技术领域

本发明涉及生物活性肽技术领域，具体涉及ACE抑制肽、制备方法及用途。

背景技术

随着我国经济的快速发展和人们生活习惯的改变，慢性非传染性疾病已成为影响人民健康的公共卫生问题。高血压是一种非传染性的慢性疾病，对于中风、心力衰竭和冠状动脉疾病的患者，高血压是一个非常重要的风险因素。据来自195个国家和地区的数据估计，2015年，有8.74亿成年人的收缩压(SBP)为140毫米汞柱或更高。预计，到2025年全世界将有约15.6亿人患有高血压。高血压现已成为全球主要的健康问题。

血管紧张素转换酶(angiotensin I-converting enzyme，ACE)是哺乳动物组织中广泛存在的羧基肽酶(EC 3.4.15.1)，在肾素-血管紧张素系统(RAS)和激肽系统(KKS)中扮演着重要的血压调节功能。ACE不仅可以将血管紧张素I转化为具有血管收缩作用的血管紧张素II，还可将血管舒张作用的缓激肽转变为没有活力的缓释肽片段。ACE活力升高破坏了正常体液中升压和降压体系的平衡，导致人体血压的升高。可见抑制ACE活性是血压降低的关键。现市场流通的降血压药，如卡托普利，依那普利，赖诺普利等，通过直接抑制ACE或阻断血管紧张素II受体起作用。尽管这些药物在控制血压方面是有效的，但它们会产生许多副作用，如：咳嗽，味觉障碍，皮疹，肾衰竭等。因此，研究学者一直致力于寻找高效的食源性ACE抑制肽。

发明内容

本发明的目的在于提供一种ACE抑制肽。

为实现上述目的，本发明提供一种ACE抑制肽，其特征在于，所述ACE抑制肽的氨基酸序列为GPPGP。

进一步，所述ACE抑制肽来自于海参天然提取或人工氨基酸合成。

本发明还提供一种所述ACE抑制肽的制备方法，包括如下步骤，

海参蛋白的提取：将海参溶于NaOH溶液中，组织均浆后，离心收集沉淀，可重复此步骤1-5次，再用蒸馏水反复搅拌冲洗至中性后再溶于乙酸中，搅拌后离心，所得上清即为海参蛋白溶液；

海参蛋白酶解：将所得海参蛋白溶液预热，加入胃蛋白酶酶解后，再加入胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶的混合酶进行酶解，再加入脯氨酸内肽酶酶解得到酶解液；

ACE抑制肽的制备：酶解液经超滤膜超滤浓缩后得到透过液，将透过液进行冷冻干燥浓缩，得到冻干粉；将所得到的冻干粉溶于纯水，采用Superdex^TM Peptide凝胶柱进行洗脱，收集ACE抑制活性较高的组分，将收集组分冷冻干燥进行浓缩，获得海参蛋白ACE抑制肽组分；再用纯水溶解该海参蛋白ACE抑制肽组分后上样于高效液相色谱ZORBAX SB-C18柱进行分离，收集ACE抑制活性较高的活性峰即为高纯度的海参蛋白ACE抑制肽；

ACE抑制肽的筛选：利用质谱检测活性较高的组分，得到具有ACE抑制活性的肽段的氨基酸序列为DEGHKGPPGP；利用在线软件Biopep模拟胃蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶对得到的肽段进行酶切；利用分子对接技术对原序列及酶解后得到的肽序列进行高活性筛选，得到ACE抑制活性肽序列GPPGP。

所述海参蛋白提取的作用是富集海参中的蛋白，去除海参多糖、脂质及皂苷；

所述ACE抑制肽的分离纯化是以ACE抑制活性为指标，利用超滤(3kDa超滤膜)、Superdex^TM Peptide凝胶柱及反相高效液相色谱(RP-HPLC)对ACE抑制肽组分进行分离纯化。