[发明专利]一种基于酶催化透明质酸定点修饰多肽的方法

权利要求书

1.一种基于酶催化透明质酸定点修饰多肽的方法，其特征在于，步骤如下：将透明质酸衍生物、多肽和微生物转谷氨酰胺酶在缓冲液中混合后，将得到的混合液在25～40℃下水浴2h以上，实现透明质酸定点修饰多肽；

所述透明质酸衍生物包括HA-NH₂或HA-Q；

所述HA-NH₂是在透明质酸的还原末端引入单一活性氨基后得到；

所述HA-Q的制备包括：含单一谷氨酰胺残基的小肽的羧基经碳二亚胺/N-羧基琥珀酰亚胺活化后，与所述HA-NH₂以酰胺键共价结合，得到HA-Q；

所述含单一谷氨酰胺残基的小肽为NR1-QX1-COOH、NR1-Q-X1-X2-COOH、NR1-X1-Q-X2-COOH、NR1-Q-X1-X2-X3-COOH、NR1-X1-Q-X2-X3-COOH或NR1-X1-X2-Q-X3-COOH；

其中R1为N-端保护基团；

X1、X2、X3为谷胺酰胺、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸之外的任一氨基酸残基；

所述Q为谷氨酰胺；

所述多肽为TP5、ES2-TH和PCK3145；

所述TP5的氨基酸序列为RKDVY，ES2-TH的氨基酸序列为IVRRADRAAVPGGCGKRK，PCK3145的氨基酸序列为EWQTDNCETCTCYGT。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明质酸的重均分子量小于50kD。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述透明质酸衍生物为HA-NH₂时，所述多肽含有谷氨酰胺残基。

4.根据权利要求1或 3所述的方法，其特征在于，所述混合液中多肽的含量 0 .5～

10 .0mg/mL。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述混合液中的HA-NH₂含量为多肽摩尔质量的0 .5～1 .5倍。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述N-端保护基团包括芐氧羰基、叔丁氧羰基或对甲氧基芐基。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当所述透明质酸衍生物为HA-Q时，所述多肽含有赖氨酸残基。

8.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，所述混合液中多肽的含量为0 .5～

10 .0mg/mL；

所述混合液中的HA-Q含量为多肽摩尔质量的0 .5～1 .5倍。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合液中微生物转谷氨酰胺酶的含量为0 .01～5U/mL。