[发明专利]一种基于酶催化透明质酸定点修饰多肽的方法

说明书

本发明提供了一种基于酶催化透明质酸定点修饰多肽的方法，属于生物医药技术领域，包括：将透明质酸衍生物、多肽和微生物转谷氨酰胺酶在缓冲液中混合后，将得到的混合液在25～40℃下水浴2h以上，实现透明质酸定点修饰多肽；所述透明质酸衍生物包括HA‑NH₂或HA‑Q。本发明中的HA‑NH₂和HA‑Q经微生物转谷氨酰胺酶催化，可实现对多肽的定点修饰，修饰得到的产物，与未修饰的多肽相比，半衰期显著延长、生物利用度显著提高、生物活性无明显变化。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域技术领域，尤其涉及一种基于酶催化透明质酸定点修饰多肽的方法。

背景技术

多肽一般指数量不等的α-氨基酸以肽键连接形成的化合物，作为药物具有生物活性机制明确、特异性高、毒副作用低等优点，临床上广泛用于刺激造血、抗肿瘤、免疫调节等。然而多肽类药物体内半衰期普遍较短，需要高剂量、频繁用药，极大增加了用药成本，降低了患者的用药依从性。对多肽分子结构进行修饰是解决半衰期短的常用方法，其中聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)化学修饰是应用最为广泛的方法。但PEG为非生物可降解的，体内易蓄积，不适合大剂量、长期用药；此外PEG化学法修饰效率低，且难以实现定点修饰；所得PEG修饰产物活性常常显著降低、缺乏靶向性。因此，迫切需要开发新型的聚合物和修饰策略用于提升多肽药物的临床疗效。

HA属于糖胺聚糖家族，是一种天然亲水性高分子聚合物，具有良好的生物可降解性、生物相容性等独特的性质；肿瘤细胞表面存在HA特定的受体，HA修饰可实现药物的靶向输送，故具有开发成为多肽修饰剂的潜力。然而,受HA固有结构特征的限制，现有化学方法反应步骤多、条件剧烈且难以实现定点修饰。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于酶催化透明质酸定点修饰多肽的方法，采用本发明的方法可实现对多肽的定点修饰。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种基于酶催化透明质酸定点修饰多肽的方法，包括：将透明质酸衍生物、多肽和微生物转谷氨酰胺酶在缓冲液中混合后，将得到的混合液在25～40℃下水浴2h以上，实现透明质酸定点修饰多肽；

所述透明质酸衍生物包括HA-NH₂或HA-Q；

所述HA-NH₂是在透明质酸的还原末端引入单一活性氨基后得到；

所述HA-Q的制备包括：含单一谷氨酰胺残基的小肽的羧基经碳二亚胺/N-羧基琥珀酰亚胺活化后，与所述HA-NH₂以酰胺键共价结合，得到HA-Q。

优选的，所述透明质酸的重均分子量小于50kD。

优选的，当所述透明质酸衍生物为HA-NH₂时，所述多肽含有谷氨酰胺残基。

优选的，所述混合液中多肽的含量为0.5～10.0mg/mL。

优选的，所述混合液中的HA-NH₂含量为多肽摩尔质量的0.5～1.5倍。