[发明专利]一种新型核酸探针标记方法

权利要求书

1.一种新标记探针，包括：

a)荧光探针5’端标记一个常规荧光基团、3’端标记一个相对应的淬灭基团；

b)在DNA探针序列前1/3到后1/3的中间序列，标记一个与5’端相同的荧光基团；和

c)说明书，所述说明书提供了PCR检测中每个单通道检测两个目的基因的方法，其中通过对样本进行PCR扩增，将所述新探针的检测信号和常规探针检测信号进行区分，计算目的基因拷贝数。

2.如权利要求1所述的标记探针，其中，该探针能用于检测基因的点突变、拷贝数变异和表达水平。

3.如权利要求1所述的标记探针，其中，所述PCR为数字PCR。

4.如权利要求1所述的标记探针，其中，第2个荧光基团标记范围为DNA探针序列前1/3到后1/3的中间序列。

5.如权利要求1所述的标记探针，其中，探针长度包括50bp以下、40bp以下、30bp以下、20bp以下，或10bp以下。

6.如权利要求1所述的标记探针，其中，所述5’端标记荧光基团选自由FAM、Tetrachlorofluorescein(TET)、Alexa 488、Alexa 532、CF、HEX、VIC、ROX、Texas Red、QuasarFITC、cy3、cy5、6-joe、EDANS、rhodamine6G(P6G)、tetramethyirhodamine(TMR)、tetramethylrhodamine isothiocyanate(TMRITC)、x-rhodamine、Texas red、生物素、和亲和素所组成的组。

7.如权利要求1所述的标记探针，其中，所述3’端标记淬灭基团选DDQ-I、DDQ-II、Dabcyl、Eclipse、Iowa Black FQ、Iowa Black RQ、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3、QSY7、QSY-21、QSY33、Ferrocene及其衍生物、methyl viologen、tetramethylrhodamine(TAMRA)、Minorgroove binding non-fluorescent quencher(MGBNFQ)和N,N'-dimethyl-2,9-diazopyrenium所组成的组。

8.如权利要求1所述的标记探针，其中，所述5’端标记荧光基团与所述3’端标记淬灭基团相对应。