[发明专利]全人源抗金黄色葡萄球菌α-溶血素重组抗体

说明书

本发明公开了一种抗金黄色葡萄球菌α‑溶血素单链抗体scFv2或scFv46；还公开了一种抗金黄色葡萄球菌α‑溶血素重组抗体scFv2‑Fc或scFv46‑Fc，包含前述的scFv2或scFv46和人抗体恒定区Fc段氨基酸序列；还公开了一种全人源抗金黄色葡萄球菌α‑溶血素重组抗体的通用表达载体sp‑Fc/pcDNA3.1，其编码基因的核酸序列如SEQ ID No:13所示；还公开了一种全人源抗金黄色葡萄球菌α‑溶血素重组抗体的真核表达载体，是将前述的单链抗体插入sp‑Fc/pcDNA3.1中得到；还公开了重组表达载体sp‑scFv2‑Fc/pMH3或sp‑scFv46‑Fc/pMH3。

技术领域

本发明涉及抗体工程技术领域，具体涉及一种全人源抗金黄色葡萄球菌α-溶血素重组抗体。

背景技术

金黄色葡萄球菌是一种主要的革兰氏阳性致病菌，其感染可造成危及生命的严重疾病，如肺炎、菌血症、心内膜炎等。抗生素是长期以来治疗金黄色葡萄球菌感染的主要有效方式。但随着世界范围内抗生素、消毒剂滥用以及抗生素残留向环境释放的情况越来越严重，致病性强、传播途径广的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)已成为全球院内感染的首要病原菌。万古霉素中间体金黄色葡萄球菌(VISA)菌株和高度耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA)菌株的出现为临床控制金葡菌感染带来更严峻的考验。因此，研发新的抗金黄色葡萄球菌的药物迫在眉睫，发现新的有效药物靶点已经成为了当前研发的新热点。

α-溶血素(α-Hemolysin,α-HL)是金黄色葡萄球菌分泌的主要毒力因子之一，是一种细胞外毒素。α-HL的前体由319个氨基酸组成，其前体能够在宿主细胞膜上结合并寡聚形成一个相对分子质量为2.32×10⁵的七聚体，再通过折叠形成一个β桶状的跨模区域，此区域允许分子量小于2kDa的分子通过，如K⁺、Na⁺等，最终引起靶细胞的坏死。同时，α-HL引起的细胞信号通路改变也发挥着重要作用。敲除α-HL基因的金黄色葡萄球菌菌株感染的肺炎小鼠表现出致死率显著降低。

近年来，生物医药彻底改变了医药工业，为那些传统治疗失败或以前没有治疗选择的患者带来了新希望。单克隆抗体药物的发展经历了鼠源性单克隆抗体、嵌合型单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全人源单克隆抗体的四个阶段。虽然单克隆抗体具有纯度高、效价高、特异性强、结构均一、血清交叉反应少、制备成本低等多种优点，但以小鼠为细胞来源的抗体可使人体产生人抗鼠抗体反应(HAMA)，从而会削弱单克隆抗体的治疗作用，甚至导致机体的免疫病理损伤。因此，高亲和力、高特异性、毒副作用小的全人源基因工程抗体是当前重组抗体技术研发的趋势所在。

人源化抗体是在嵌合抗体的基础上减少鼠源成分，保留鼠抗体CDR区，其余全部替换成人抗体相应部分，经过改型抗体，人源成分达90％即为所指的人源化抗体。在疾病治疗中，人源化抗体优于鼠源抗体，不仅因为抗体中鼠源性成分的减少降低了机体的免疫排斥反应，还在于人源化抗体中Fc段能够诱发机体的效应技能募集效应因子或效应细胞，后者对靶细胞具有杀伤作用。还有一个优点在于人源化抗体在体内的半衰期可达数天，而鼠源抗体的半衰期则不到20h。单链抗体(single chainantibodyfragment，scFv)，是由抗体重链可变区和轻链可变区通过15～20个氨基酸的短肽(linker)连接而成的抗体。scFv能较好地保留其对抗原的亲和活性,并具有分子量小、穿透力强和抗原性弱等特点。重组抗体药物是生物医药领域的研发热点，代表了药物治疗领域的最新发展方向。高亲和力、高特异性、毒副作用小的全人源基因工程抗体是当前重组抗体技术研发的趋势所在。