[发明专利]一种短肽类发酵产物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种短肽类发酵产物及其制备方法和应用。其制备方法包括以下步骤：(1)将保藏编号为CCTCC NO：M 2018731的产黄青霉DXY‑1活化后，接种至培养基中，震荡培养65～80h，得种子液；(2)将种子液接种至液体培养基中，震荡培养7～10天后，收集发酵液；(3)破碎发酵液中的菌丝球，再加入乙酸乙酯萃取，收集并浓缩有机相即可。本发明提取得到的发酵产物能治疗铜绿假单胞菌和紫色杆菌引起的感染，在海洋真菌代谢产物中含量相对较高，可以大规模提取。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种短肽类发酵产物及其制备方法和应用。

背景技术

世界卫生组织(WHO)在2014年发表的报告书中指出，具有强力耐药性的“超级细菌”的发病感染正不断蔓延并呈逐年严重化的趋势，人类的生存受到巨大威胁，解决日益严重的细菌耐药性问题已成为全球关注的重大难题。因此，通过寻找新的作用靶点是生物医学领域开发新型抗菌药物的新战略。群体感应(Quorum sensing,QS)是细菌细胞之间进行通讯的系统，它能够调控细菌的生存与致病性，这引起了药学家的密切关注，已成为药学界研制新型抗菌药物的重要靶点。以细菌QS系统为目标进行筛选得到的抗菌药物，在不破坏细菌细胞生长的情况下，仅抑制细菌毒力因子、生物被膜的产生，从而使细菌的感染能力降低或丧失。由于对细菌没有生存压力，理论上不易诱导细菌耐药性突变。因此，以抑制QS系统为目的的药物研究能有效地治疗细菌感染，有望成为解决耐药细菌感染的新型策略。

海洋真菌独特的生活环境使其生物合成机制的复杂程度和代谢产物种类的多样性远超其他来源的细菌、真菌，从中发现结构新颖、有特殊生物活性的新型化合物的机率将远远高于普通微生物。环二肽类化合物是多产于海洋真菌代谢产物中的一类活性短肽类化合物。采用有机溶剂萃取法获得的产黄青霉代谢产物具有显著地抑制紫色杆菌QS系统的活性。目前尚未见该短肽类化合物具有抑制细菌QS活性的报道，在市场上也尚未见到与此相关的药物。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种短肽类发酵产物及其制备方法和应用，可有效的淬灭细菌群体感应系统的活性，治疗其引起的感染。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种短肽类发酵产物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将保藏编号为CCTCC NO：M 2018731的产黄青霉DXY-1活化后，接种至培养基中，于25～30℃、120～150r/min震荡培养65～80h，得种子液；

(2)将种子液接种至液体培养基中，于25～30℃、120～150r/min震荡培养7～10天后，收集发酵液；其中，种子液的接种量为液体培养基体积的5～10％；

(3)破碎发酵液中的菌丝球，再加入乙酸乙酯萃取3～5次，收集并浓缩有机相即可；其中，发酵液与乙酸乙酯的体积比为1:1～3。

进一步地，步骤(1)中培养基为PDA培养基，其具体组成如下：2％葡萄糖、2％琼脂、20％马铃薯，以及0.01％氯霉素，溶于陈海水，并在115℃灭菌30min；培养条件为：28℃、150r/min震荡培养72h。

进一步地，步骤(2)中种子液的接种量为液体培养基体积的5％；液体培养基的具体组成如下：4％葡萄糖、1％蛋白胨、0.5％NaCl，溶于陈海水，并在115℃灭菌30min。

进一步地，步骤(2)中培养条件为28℃、150r/min震荡培养7天。

进一步地，还包括步骤(4)：

用甲醇溶解步骤(3)所得产物后，分别用二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇，以及甲醇作为洗脱液进行硅胶柱层析，洗脱体积为一个柱体积。

进一步地，二氯甲烷-甲醇作为洗脱液进行洗脱时，以20:1、10:1、5:1、2:1和1:1的比例进行梯度洗脱。