[发明专利]一种用于鉴定表皮葡萄球菌的序列及方法有效
| 申请号： | 201910685733.6 | 申请日： | 2019-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN110564873B | 公开（公告）日： | 2022-09-06 |
| 发明（设计）人： | 程寻;祝令香;郭永;杨文军 | 申请（专利权）人： | 新羿制造科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/45 |
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| 地址： | 102200 北京市昌平*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 鉴定 表皮 葡萄球菌 序列 方法 | ||
1.一种用于表皮葡萄球菌鉴定的特异性DNA片段，其特征在于，所述特异性DNA片段的核苷酸序列为SEQ ID No：1：AAGAAAAACGTATTCCAATTAGTATTGAGGTTCCTGATGAAATTGATCGTATCTCTATGAATACTGTTGAGCTTAGTCGTATTATCGGTATTATAGTTGATAATGCTATTGAAGCTTCAGAAAATCTTGAGGAACCACTCATCAATATC。
2.一种非诊断目的的鉴定表皮葡萄球菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
步骤1：针对权利要求1的所述特异性DNA片段设计用于扩增检测的上、下游引物和探针；
步骤2：获得细菌DNA样本，得到待测模板；和
步骤3：使用数字PCR方法，鉴定所述细菌DNA样本是否为表皮葡萄球菌。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1中所述引物Tm值在56-65℃，探针Tm值在65-75℃。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID No：2：CGTATTCCAATTAGTATTGAGGTTC；所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID No：3：AGTGGTTCCTCAAGATTTTCTGA；所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No：4：AGCTTAGTCGTATTATCGGT。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，进行数字PCR扩增时，所述引物的浓度为3-6μM、探针的浓度为1-8μM。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3中所述数字PCR的反应条件为：95℃预变性10min；95℃变性30s，60℃退火30s，40个循环。
7.一种用于鉴定表皮葡萄球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括鉴定权利要求1所述的特异性DNA片段的试剂。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，鉴定权利要求1所述的特异性DNA片段的试剂是数字PCR扩增试剂。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述数字PCR扩增试剂包括上游引物、下游引物和探针，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID No：2：CGTATTCCAATTAGTATTGAGGTTC，所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID No：3：AGTGGTTCCTCAAGATTTTCTGA；和所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No：4：AGCTTAGTCGTATTATCGGT。
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