[发明专利]一种鉴定斑玉蕈白色菌株单核体的交配型的方法及引物

权利要求书

1.一种鉴定斑玉蕈白色菌株单核体的引物，其特征在于：包括3组引物对，第一组引物对的核苷酸序列如下：

HM1F: 5’- ACCTCTACTTCATCCTTGC-3’；

HM1R: 5’- TCTTGGGCGTCCGTTT-3’；

第二组引物对的核苷酸序列如下：

HM2F: 5’-CGTCCCAGATATTCAACTC-3’；

HM2R: 5’-GAAACCTCCAACGCACT-3’；

第三组引物对的核苷酸序列如下：

HM3F: 5’-CTGGCGTTACCTTCCC-3’；

HM3R: 5’-GTGGTTGTGGCGTGAT-3’。

2.一种鉴定斑玉蕈白色菌株单核体的方法，其特征在于：包括3组引物对，第一组引物对的核苷酸序列如下：

HM1F: 5’- ACCTCTACTTCATCCTTGC-3’；

HM1R: 5’- TCTTGGGCGTCCGTTT-3’；

第二组引物对的核苷酸序列如下：

HM2F: 5’-CGTCCCAGATATTCAACTC-3’；

HM2R: 5’-GAAACCTCCAACGCACT-3’；

第三组引物对的核苷酸序列如下：

HM3F: 5’-CTGGCGTTACCTTCCC-3’；

HM3R: 5’-GTGGTTGTGGCGTGAT-3’；

鉴定斑玉蕈白色菌株单核体的方法包括：提取斑玉蕈白色单核菌株的基因组DNA，然后分别以第一组引物对、第二组引物对和第三组引物对进行PCR扩增，PCR扩增出来的产物用1%-2%的琼脂糖凝胶电泳检测；如果不能用特异性引物扩增出条带的被认为是AxBx交配型菌株，如果能用特异性引物扩增出条带的被认为是AyBy交配型菌株。

3.根据权利要求2所述的鉴定斑玉蕈白色菌株单核体的方法，其特征在于：提取斑玉蕈白色菌株单核体的基因组DNA的方法包括下列步骤：a、将斑玉蕈白色菌株单核体在PDA平板培养基进行培养；b、培养结束后挑取菌丝放在DNA裂解液中，在75-85℃温浴5-10min后即得。

4.根据权利要求2所述的鉴定斑玉蕈白色菌株单核体的方法，其特征在于：PCR扩增反应的体系为：2ul的150ng/ul斑玉蕈白色菌株单核体DNA， 2ul的10umol/L引物，2ul的0.1mmol/LdNTP，0.5ul的高保真酶Pfu，5ul的loading buffer，用ddH₂O补齐25ul。

5.根据权利要求2所述的鉴定斑玉蕈白色菌株单核体的方法，其特征在于：PCR扩增反应的条件：94℃预变性5min；94℃变性30s；60℃退火30s；72℃延伸5min；35个循环。

6.根据权利要求2所述的鉴定斑玉蕈白色菌株单核体的方法，其特征在于：将6ulPCR扩增出来的产物与2ul的loading buffer混合，并用体积分数为1-2%琼脂糖凝胶进行电泳，然后用EC3 Imaging System 凝胶成像系统进行拍照；所述琼脂糖凝胶内添加有5ul的GeneFinder荧光染料。