[发明专利]一种结直肠癌诊断试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种结直肠癌诊断试剂盒。该试剂盒含有检测待测样品中的待测序列甲基化水平的试剂，所述待测序列位于miR‑17‑92簇转录起始位点上游3.5kb序列到下游2kb序列之间。本发明首次发现原癌非编码RNA miR‑17‑92簇在结直肠癌中的低甲基化水平，其与结直肠癌的发生发展相关。miR‑17‑92簇甲基化水平可以作为肿瘤检测的生物指标，辅助诊断结直肠癌，提高检测特异性、敏感度，降低错误率，为了解肿瘤发病机制及诊断具有十分重要的临床指导意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种结直肠癌诊断试剂盒。

背景技术

结直肠癌(Colorectal Cancer，CRC)是全球高发癌症之一。我国结直肠癌的发病率约为14.2/100,000，近20年呈大幅上升趋势，已经成为发病率上升最快的恶性肿瘤之一。结直肠癌的发生要经过正常黏膜，增生，腺瘤形成，腺瘤癌变直至浸润转移的阶段性演变，其发展过程可长达10余年。其中，腺瘤性息肉是结直肠癌最主要的癌前病变。腺瘤性息肉逐渐增大，到最终发生恶变常常需要数年时间。结直肠癌如果能在早期发现，那么经手术切除后，治愈率非常高，可达90％以上。

目前结直肠癌被认为是由环境、遗传等多种因素参与的一个多阶段多步骤累积的致病过程，其发生和致病机制颇为复杂。表观遗传(epigenntics)调控在结直肠癌的发病过程中起到重要的作用，即在基因组DNA中碱基序列未发生变化的情况下，通过DNA和组蛋白的修饰来调控基因的表达。

DNA甲基化与癌症、衰老、老年痴呆等许多疾病密切相关。启动子DNA甲基化可导致基因转录沉默，使抑癌基因、细胞周期调节基因、凋亡基因等表达极度降低或不表达。去甲基化则会诱导原癌基因的重新活化和表达，参与肿瘤的发生发展。以往大量研究表明，癌症相关基因DNA的甲基化水平改变要早于细胞恶性增生，故对其进行甲基化水平检测可用于肿瘤的预测、诊断、分级以及预后评估。因此，癌症相关基因DNA启动子的甲基化水平研究，已经成为肿瘤领域中表观遗传学和表观基因组学的重要研究内容。

近年来对于微小RNA(miRNA)的研究逐渐被重视，成为肿瘤研究的热点。miRNA是一类长度约为22nt的内源性非蛋白编码单链小分子RNA，广泛存在于真核生物中，它能够与其相应靶基因的信使RNA(mRNA)的3’端非翻译区(3’-UTR区)结合，从而使mRNA发生降解或抑制其翻译。研究表明miRNA与肿瘤关系密切，充当癌基因或抑癌基因的角色，在肿瘤细胞的生长、增殖、分化、凋亡、恶性间质转化等方面发挥重要作用。

miR-17-92簇又称为C13orf25，位于人类第13号染色体。大多数研究认为miR-17-92簇是强效的原癌基因，是原癌基因miRNA的典型代表。该簇位于MIR17HG(miR-17-92簇宿主基因)内含子中，初级转录本是一个长约0.8kb的多顺反子，编码为6个独立的成熟miRNA，即miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92a-1。它们在胚胎发育、免疫系统、肾脏和心脏发育、衰老以及肿瘤发生中发挥作用。在各种造血系统的恶性肿瘤、肺癌和多种实体肿瘤中发现miR-17-92簇高表达。在结直肠腺瘤向结直肠癌演变中，miR-17-92簇的表达量发生显著变化，并与结直肠腺瘤到腺癌的发生发展有关。然而，目前对于结直肠癌中miRNA甲基化的研究较少。miR-17-92簇甲基化水平在肿瘤中的作用还未有报道。因此，探讨miR-17-92簇甲基化水平与肿瘤的关系，为了解肿瘤发病机制及诊断具有十分重要的临床指导意义。

发明内容

本发明旨于提供了一种新的结直肠癌诊断试剂盒。

因此，本发明的目的之一在于提供一种试剂盒。

本发明所采用的技术方案如下文所述。

一种试剂盒，含有检测待测样品中的待测序列甲基化水平的试剂，所述待测序列位于miR-17-92簇转录起始位点上游3.5kb序列到下游2kb序列之间。