[发明专利]一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌高密度发酵液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、菌种种子液制备：将所述枯草芽孢杆菌活化，取活化后的枯草芽孢杆菌单菌落划线于培养基上，之后进行封胶并放入培养箱中培养，得到活化的菌株，将活化的菌株转入培养基中培养，即制得所述的菌种种子液；

步骤二、高密度发酵液的制备：将所述的菌种种子液接种在装有高密度培养基的容器中培养，制得菌悬液，将所述菌悬液离心后收集上清液，上清液过滤并除菌即制得所述的枯草芽孢杆菌高密度发酵液；所述菌株于2018年10月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO. 16568； 所述枯草芽孢杆菌高密度发酵液在抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉中的应用；所述高密度发酵液中总共有10种环脂肽，有3种 Iturins，3种 Surfactins和4种 Fengycins。

2.根据权利要求1所述枯草芽孢杆菌高密度发酵液的制备方法，其特征在于，所述菌种种子液的制备方法包括：将枯草芽孢杆菌在NA平板培养基上活化，取活化后的枯草芽孢杆菌单菌落划线于NA培养基上，之后进行封胶并倒置于温度为33℃培养箱重培养24h，得到活化的菌株，用移菌环将活化的菌株转移至LB培养基中，在温度为33~50℃，转速为180~300r/min的条件下培养24~50h，制得所述的菌种种子液。

3.根据权利要求2所述枯草芽孢杆菌高密度发酵液的制备方法，其特征在于；所述的菌种种子液于温度为-1~4℃的环境下保存备用。

4.根据权利要求3所述枯草芽孢杆菌高密度发酵液的制备方法，其特征在于，所述NA平板培养基或NA培养基的原料包括蒸馏水、牛肉浸膏、蛋白胨、葡萄糖和琼脂；其中，每1000mL蒸馏水对应3.0g牛肉浸膏、7.0g蛋白胨、10.0g葡萄糖、15.0g琼脂；

所述LB培养基的原料包括蒸馏水、氯化钠、酵母提取物和胰蛋白胨；其中，每1000mL蒸馏水对应10.0g氯化钠、5.0g酵母提取物、10.0g胰蛋白胨。

5.根据权利要求1所述枯草芽孢杆菌高密度发酵液的制备方法，其特征在于，所述高密度发酵液的制备方法包括：将所述的菌种种子液以接种量为4~7%的体积比接种于装有高密度培养基的三角瓶中，在温度为33~50℃、转速为180~300r/min的条件下培养24~48h，获得菌悬液，所述菌悬液在转速为8000~10000r/min的离心机中离心后取上清液，上清液用微孔滤膜过滤并除菌即制得所述的枯草芽孢杆菌高密度发酵液。

6.根据权利要求5所述枯草芽孢杆菌高密度发酵液的制备方法，其特征在于：所述的枯草芽孢杆菌高密度发酵液于温度为4℃的环境下保存备用。

7.根据权利要求5所述枯草芽孢杆菌高密度发酵液的制备方法，其特征在于，所述高密度培养基的原料包括：蒸馏水、黄豆粉、玉米粉、淀粉、酵母膏、NaCl、CaCl₂和MnSO₄·H₂O；其中，每1000mL蒸馏水对应25.0g黄豆粉，20.0g玉米粉，3.0g 淀粉，10g酵母膏，3g NaCl，2 gCaCl₂，2g MnSO₄·H₂O。