[发明专利]一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用

说明书

本发明实施例公开了一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用，所述枯草芽孢杆菌菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO.16568；保藏时间为：2018年10月10日。所述枯草芽孢杆菌菌株能够对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉进行有效抑制，产生较多的抗菌物质；含有枯草芽孢杆菌菌株代谢产物的枯草芽孢杆菌高密度发酵液具有广谱抗菌能力，含有高成分的环脂肽，有广阔的应用前景。且枯草芽孢杆菌高密度发酵液在抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉中取得较好效果。

技术领域

本发明实施例涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用。

背景技术

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种嗜热、好氧并产芽孢的G+杆状细菌，长期以来一直被用来发酵大豆食品、广泛用于工业酶和化学品的生产。它能产生多种抗菌素和酶，在生物防治方面，常用于防治水稻稻瘟病、小麦纹枯病和油菜菌核病，近年来也应用到水果的病害中，例如草莓的白粉病，芒果的炭疽病等。

枯草芽孢杆菌拥有着广泛的抑菌谱，其主要原因在于它可以分泌多种拮抗类物质，其中有通过非核糖体合成的低分子抗菌肽以及通过核糖体合成的大分子蛋白类细菌素。研究发现，枯草芽孢杆菌的主要抑菌物质是通过非核糖途径产生的环脂肽类物质，主要分为表面活性素(Surfactins)、伊枯草菌素(Iturins)和芬芥素(Fengycins)，是由亲水的肽链和亲油的脂肪酸链(14～17个碳原子)组成。枯草芽孢杆菌分泌的抗菌物质可能通过以下几种途径来抑制病原菌：(1)阻碍病原菌的细胞壁合成，并损伤细胞膜；(2)作用于病原菌的蛋白质合成系统，阻碍蛋白质合成；(3)作用于能量代谢系统，使微生物无法生成孢子；(4)加速植物种子萌发，增强植物自身抗病能力。因此具有高抗真菌活性的枯草芽孢杆菌无论在生物防止方面还是在保障食品安全方面都有着重要作用。

但是现有的枯草芽孢杆菌罕有发现在抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉中取得较好效果的菌株，且代谢物质环脂肽含量较少。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用，在抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉中取得较好效果，并解决现有技术中抗菌环脂肽含量的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面，提供一种枯草芽孢杆菌菌株，所述菌株于2018年10月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNO.16568。

根据本发明实施例的第二方面，提供一种含有枯草芽孢杆菌菌株代谢产物的枯草芽孢杆菌高密度发酵液。

根据本发明实施例的第三方面，提供一种枯草芽孢杆菌高密度发酵液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、菌种种子液制备：将所述枯草芽孢杆菌活化，取活化后的枯草芽孢杆菌单菌落划线于培养基上，之后进行封胶并放入培养箱中培养，得到活化的菌株，将活化的菌株转入培养基中培养，即制得所述的菌种种子液；

步骤二、高密度发酵液的制备：将所述的菌种种子液接种在装有高密度培养基的容器中培养，制得菌悬液，将所述菌悬液离心后收集上清液，上清液过滤并除菌即制得所述的枯草芽孢杆菌高密度发酵液。

进一步的，所述菌种种子液的制备方法包括：将枯草芽孢杆菌在NA平板培养基上活化，取活化后的枯草芽孢杆菌单菌落划线于NA培养基上，之后进行封胶并倒置于温度为33℃培养箱重培养24h，得到活化的菌株，用移菌环将活化的菌株转移至LB培养基中，在温度为33～50℃，转速为180～300r/min的条件下培养24～50h，制得所述的菌种种子液。

进一步的，所述的菌种种子液于温度为-1～4℃的环境下保存备用。