[发明专利]多环芳烃底物吸附内衬及筛选多环芳烃降解突变菌的方法

权利要求书

1.一种多环芳烃底物吸附内衬，其特征在于：所述底物吸附内衬为中空圆柱形或者中空方柱形，其外径比96孔板小孔内径小0.5～1.0mm，壁厚为0.1～0.3mm，柱高为3～7mm，壁体设有多个圆形或椭圆形通孔；所述96孔板小孔内径为10.7±0.2mm或6.8±0.2mm，所述通孔的直径或长轴为0.5～1.0mm；

所述多环芳烃包括萘、菲、荧蒽、蒽和苯并(a)芘；所述底物吸附内衬的材质为塑料或碳纤维。

2.根据权利要求1所述的多环芳烃底物吸附内衬，其特征在于：所述96孔板小孔内径为10.7±0.2mm，所述底物吸附内衬的外径为10.0±0.2mm，壁厚为0.2～0.3mm，柱高为5.5～6.5mm，所述通孔的直径或长轴为0.75～0.85mm。

3.根据权利要求1所述的多环芳烃底物吸附内衬，其特征在于：所述96孔板小孔内径为6.8±0.2mm，所述底物吸附内衬的外径为6.0±0.2mm，壁厚为0.1～0.2mm，柱高为3.5～4.5mm，所述通孔的直径或长轴为0.55～0.65mm。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的多环芳烃底物吸附内衬的吸附方法，其特征在于：包括如下步骤：在可调恒温电炉上放置容器，在容器内铺满干燥的加热介质，在加热介质上放置一耐热玻璃浅盘，底部放置适量多环芳烃晶体，底物上方放置隔帘，将塑料内衬置于隔帘上平整铺好，用盖板将浅盘封闭；根据多环芳烃的种类，设定电炉加热温度及保温时间，得到在表面均匀吸附多环芳烃晶体的内衬。

5.根据权利要求4所述的多环芳烃底物吸附内衬的吸附方法，其特征在于：所述加热介质为过100目筛的河沙；所述隔帘为特氟龙材质，呈网状结构；所述盖板为特氟龙材质。

6.一种筛选多环芳烃降解突变菌的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1)将多环芳烃降解菌悬液滴于温度保持在20～30℃的无菌金属铁片上，置于诱变室内，以氦气作为载体，功率为100～120w，氦气流量为9～11L/min，处理时间15～150s；

S2)诱变完成后，用无菌水洗脱菌膜，采用稀释涂平板法将洗脱液稀释后涂营养琼脂平板，在28～32℃下培养18～24h，平板长出单菌落后，取已灭菌96孔板，取权利要求1至3中任一项所述的多环芳烃底物吸附内衬吸附多环芳烃后，置于96孔板小孔内，然后在小孔内注入无机盐培养基，用接种针挑取单菌落接种到96孔板小孔的无机盐培养基中，28～32℃下静止培养24～72h；

S3)将培养结束后的96孔板置于酶标仪下检测培养液的吸光度值；其中，吸光度值低于对照的，是负突变；吸光度值高于对照的，是正突变。

7.根据权利要求6所述的筛选多环芳烃降解突变菌的方法，其特征在于：所述多环芳烃降解菌采用Moraxella osloensis CFP312，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60595。

8.根据权利要求6所述的筛选多环芳烃降解突变菌的方法，其特征在于：所述酶标仪的检测波长为600nm。

9.根据权利要求6所述的筛选多环芳烃降解突变菌的方法，其特征在于：所述无机盐培养基包括如下组分：Na₂HPO₄ 0.8g/L、KH₂PO₄ 0.2g/L、(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O 0.001g/L、(NH₄)₂SO₄1g/L、MgSO₄·7H₂O 0.2g/L、FeCl₃·3H₂O 0.005g/L、CaCl₂·2H₂O 0.1g/L。