[发明专利]一种提高去甲四环素产量的方法

权利要求书

1.产去甲四环素工程菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括弱化金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)CGMCC4.1043中金霉素生物合成基因ctcK，获得基因弱化菌株作为产去甲四环素工程菌；所述弱化包括敲除或降低基因的表达。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括增强金霉素链霉菌中金霉素生物合成基因ctcB，获得基因增强菌株作为产去甲四环素工程菌；

所述增强的途径选自以下1)～4)，或任选的组合：

1)通过导入具有所述基因的质粒而增强；

2)通过增加染色体上所述基因的拷贝数而增强；

3)通过改变染色体上所述基因的启动子序列而增强；

4)通过将强启动子与所述基因可操作地连接而增强；

其中，基因ctcB来自Kitasatospora aureofaciens DM-1，用于扩增该基因的引物如SEQ ID NO:1-2所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括增强金霉素链霉菌中外排基因ctcR和/或抗性基因ctcC，获得基因增强菌株作为产去甲四环素工程菌；

基因ctcR、ctcC来自Kitasatospora aureofaciens DM-1，用于扩增上述基因的引物分别如SEQ ID NO:3-6所示。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括增强金霉素链霉菌中外排基因ctcR和/或抗性基因ctcC，获得基因增强菌株作为产去甲四环素工程菌；

基因ctcR、ctcC来自Kitasatospora aureofaciens DM-1，用于扩增上述基因的引物分别如SEQ ID NO:3-6所示。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括增强金霉素链霉菌中金霉素生物合成基因ctcK的下游基因，获得基因增强菌株作为产去甲四环素工程菌；其中，所述金霉素生物合成基因ctcK的下游基因选自基因ctcH、ctcX、ctcE、ctcJ、ctcQ、ctcL、ctcM、ctcN和ctcO中的至少一种；

基因ctcH、ctcX、ctcE、ctcJ、ctcQ、ctcL、ctcM、ctcN、ctcO来自Kitasatosporaaureofaciens DM-1，用于扩增上述基因的引物分别如SEQ ID NO:7-24所示。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，基因ctcR、ctcC、ctcH、ctcX、ctcE、ctcJ、ctcQ、ctcL、ctcM、ctcN、ctcO由链霉菌组成型强启动子ermEp*或kasOp*驱动。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，基因ctcR、ctcC、ctcH、ctcX、ctcE、ctcJ、ctcQ、ctcL、ctcM、ctcN、ctcO由链霉菌组成型强启动子kasOp*驱动。

8.按照权利要求1-7任一项所述方法构建得到的产去甲四环素工程菌。