[发明专利]一种建库方法及应用

权利要求书

1.一种用于检测目的基因变异情况的扩增子文库构建的引物组合，包括：

根据目标扩增子设计的上游外引物F1、上游内引物F2和下游引物R；

所述上游外引物F1依次由测序接头序列1、用于区分不同样本的barcode序列和通用序列组成；

所述上游内引物F2依次由通用序列和所述目标扩增子的上游特异性引物序列组成；

所述下游引物R依次由测序接头2和所述目标扩增子的下游特异性引物序列组成。

2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于：所述上游内引物F2依次由通用序列、分子标签序列和所述目标扩增子的上游特异性引物序列组成。

3.根据权利要求2所述的引物组合，其特征在于：所述分子标签序列由6-30个碱基组成，包括随机碱基和至少一组特定碱基；所述特定碱基设置于随机碱基中；每组特定碱基由1-5个碱基组成；所述barcode序列为长度为6-12nt、无3个以上连续碱基，且GC含量为40-60%的核苷酸序列；

所述通用序列的长度为16-25nt，且无连续碱基，GC含量为35-65%，无明显二级结构。

4.根据权利要求1-3任一项所述的引物组合，其特征在于：所述测序接头1和所述测序接头2为根据不同测序平台选择对应的测序接头。

5.根据权利要求4所述的引物组合，其特征在于：

所述测序平台为Illumina平台，所述测序接头1为I5，所述测序接头2为I7；

或所述测序平台为Ion Torrent平台，所述测序接头1为A，所述测序接头2为P；

或所述测序平台为BGI/MGI平台；

或，所述通用序列的核苷酸序列为序列1。

6.一种用于检测目的基因变异情况的扩增子文库构建的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-3任一项所述的引物组合。

7.权利要求1-3任一项所述的引物组合或权利要求6所述试剂盒的任一以下应用：

（1）在检测目的基因变异情况的扩增子文库构建中的应用；

（2）检测待测样本目标区域突变位点或变异情况中的应用；

（3）在检测待测样本目标区域的变异频率中的应用。

8.一种用于检测目的基因变异情况的扩增子文库构建方法：包括如下步骤：

用权利要求1-3任一项所述的引物组合或权利要求6所述的试剂盒，以待测样本的DNA或cDNA为模板，进行一步PCR扩增，得到扩增产物，即为目标基因的扩增子文库。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述待测样本为组织样本、冰冻样本、穿刺样本、FFPE样本、血液、尿液、脑脊液或胸水。

10.一种检测待测样本目的基因的变异情况的方法，包括如下步骤：

1）用权利要求8所述的方法制备目的基因的扩增子文库；

2）将所有样本的目的基因的扩增子文库混匀后稀释，得到测序DNA文库；

3）测序所述测序DNA文库，得到测序结果，根据测序结果分析待测样本目的基因的变异情况。