[发明专利]一种用于鉴定牛瑟氏泰勒焦虫的引物组合及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴定牛瑟氏泰勒焦虫的引物组合，其特征在于，包括具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的下游引物。

2.权利要求1所述的引物组合在制备用于鉴定牛瑟氏泰勒焦虫的试剂盒中的应用。

3.一种用于鉴定牛瑟氏泰勒焦虫的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液。

5.一种鉴定牛瑟氏泰勒焦虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获得样本；

(2)提取所述样本的DNA样本；

(3)利用权利要求1所述的引物组合对步骤(2)所述DNA样本进行PCR扩增；

(4)利用凝胶电泳检测步骤(3)PCR扩增得到的PCR产物，如果PCR产物检测到目标条带，则判定所述样本牛瑟氏泰勒焦虫阳性。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述目标条带大小约492bp。

7.根据权利要求5所述的方法，基特征在于，步骤(3)中PCR扩增体系包括：模板0.1-0.5μL，优选0.3μL；上下游引物各0.1-0.5μL，优选0.2-0.5μL，更优选0.3μL；2×DNA mastermix 10μL，ddH₂O 9μL。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)中PCR扩增程序包括：94℃变性45s，退火温度56-64℃，72℃延伸30-120s，35个循环；72℃再延伸10min；4℃保存。

9.根据权利要求5-8任一所述方法，进一步包括将检测到目标条带的PCR产物进行测序的步骤。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，如果测序结果与已知牛瑟氏泰勒焦虫相应序列的相似性超过99％，则判定所述样本牛瑟氏泰勒焦虫阳性。