[发明专利]一种酶突变体在审
| 申请号： | 201910698490.X | 申请日： | 2018-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN110295159A | 公开（公告）日： | 2019-10-01 |
| 发明（设计）人： | 刘松;陈坚;堵国成;赵伟欣 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酶突变体 酶活 碱性果胶酶 胞外酶 融合 基因工程技术 功能性多肽 天冬酰胺酶 脂肪氧合酶 基础构建 胞内酶 野生型 文库 | ||
1.一种得到高表达、高活力及高稳定性的酶突变体的方法，其特征在于，包含如下步骤：
步骤1：构建功能性多肽文库；
步骤2：将步骤1中功能性多肽文库所得的表达宿主细胞以荧光强度为筛选标准，进行初筛，筛选出强荧光强度的宿主细胞；
步骤3：将步骤2中初筛后获得的强荧光强度的宿主细胞进行培养，以荧光强度为筛选标准，进行复筛鉴定，再次筛选出具有强荧光强度的宿主细胞；
步骤4：将步骤3中复筛所得的具有强荧光强度的宿主细胞中的表达载体进行荧光蛋白表达基因缺失，将缺失后的表达载体重新进行异源表达，获得酶突变体；
步骤5：将获得的酶突变体经过热处理后进行稳定性测定，筛选出具有高稳定性的酶突变体；
所述步骤1中的功能性多肽文库包含宿主细胞；所述宿主细胞含有功能性表达载体；所述功能性表达载体包含不同长度及氨基酸组成的双亲短肽(self-assemblingamphipathic peptide，SAP)、不同长度及不同刚柔性的连接肽(linker)、荧光蛋白表达基因以及待筛选酶表达基因；
所述酶为碱性果胶酶；
所述碱性果胶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
2.一种酶突变体，其特征在于，所述酶突变体是通过在氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的酶的N端依次连接氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的连接肽以及氨基酸序列如SEQ IDNO.71所示的双亲短肽得到的；
或者，所述酶突变体是通过在氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的酶的N端依次连接氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的连接肽以及氨基酸序列如SEQ ID NO.72所示的双亲短肽得到的；
或者，所述酶突变体是通过在氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的酶的N端依次连接氨基酸序列如SEQ ID NO.66所示的连接肽以及氨基酸序列如SEQ ID NO.73所示的双亲短肽得到的。
3.如权利要求2所述的一种酶突变体，其特征在于，所述酶为碱性果胶酶。
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