[发明专利]β-内酰胺酶敏感型纳米探针及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201910699054.4 | 申请日： | 2019-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN110441527B | 公开（公告）日： | 2022-06-10 |
| 发明（设计）人： | 陈芸;孙建国;邵华;朱建华;白云飞;胡琳璘;牛一民;彭英 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学;东南大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/573 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 唐循文 |
| 地址： | 211166 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 内酰胺 敏感 纳米 探针 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于制备步骤为：按比例，将5mg两亲性聚合物生物素-聚乙二醇-(β-内酰胺)-硬脂胺，即Biotin-PEG-LA-C18，和1mg报告多肽共同溶入2mL二甲基亚砜中，所述报告多肽的序列为：AVLGVDPFR、AVVGVDPFR、AVLKGDF和GVDGFG，然后将所得混合溶液逐滴加入到10mL水溶液中，搅拌，透析除去二甲基亚砜，过220μm膜即得到纳米探针；所述Biotin-PEG-LA-C18的制备方法为：将生物素-聚乙二醇与β-内酰胺共价结合得到生物素-聚乙二醇-(β-内酰胺)，然后在与硬脂胺共价结合得到最终两亲性聚合物。
2.根据权利要求1所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于所述Biotin-PEG-LA-C18重均分子量2000-3000。
3.根据权利要求1所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于所述Biotin-PEG-LA-C18和报告多肽质量比为5:1。
4.根据权利要求1所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于制备步骤为：取1.0mg重均分子量为2000Da的生物素-聚乙二醇、0.2mgβ-内酰胺、0.1mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.15mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺共同溶入50mL甲酰胺中，30℃，500rpm搅拌反应24小时；然后将反应液转移到截留分子量：1000Da的透析袋中，用去离子水透析24小时，然后冻干得到生物素-聚乙二醇-(β-内酰胺)；称取0.5mg生物素-聚乙二醇-(β-内酰胺)、0.1mg硬脂胺、0.2mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.1mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺共同溶入50mL二甲基亚砜中，30℃，500rpm搅拌反应24小时，然后将反应液转移到截留分子量：1000Da的透析袋中，用二甲基亚砜透析12小时，然后用去离子水透析24小时，冻干得到生物素-聚乙二醇-(β-内酰胺)-硬脂胺。
5.权利要求1-4任一所述制备方法制得的β-内酰胺酶敏感型纳米探针。
6.权利要求5所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的固定方法，其特征在于通过生物素与链霉亲和素反应将纳米探针固定在琼脂糖磁珠上，包括以下步骤：将磁珠和β-内酰胺酶敏感型纳米探针按体积比2:1在pH 7.4磷酸缓冲液中孵育2小时，并每隔0.5小时搅拌一次，充分混匀磁珠和纳米探针，2小时后洗涤除去未固定的纳米探针。
7.权利要求5所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针在制备检测尿液中β-内酰胺酶试剂盒中的应用。
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