[发明专利]新型鹅星状病毒SYBR Green染料法荧光定量PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一组引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的引物对在制备检测新型鹅星状病毒的试剂或试剂盒中的应用。

3.一种新型鹅星状病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR检测试剂盒含有权利要求1所述的引物对。

4.根据权利要求3所述的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR检测试剂盒中还包括：标准品质粒和荧光定量PCR反应试剂。

5.根据权利要求4所述的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述标准品质粒由如下方法制备而成：

以新型鹅星状病毒基因组为模板，采用SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示的引物进行PCR，得到扩增产物，所述扩增产物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；将扩增产物连接到pMD18-T载体上，筛选阳性克隆并提取质粒DNA，即制备得到标准品质粒。

6.根据权利要求4所述的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR反应试剂包括TB Green^TM Fast qPCR Mix和无菌去离子水。

7.权利要求3-6任一项所述的荧光定量PCR检测试剂盒在如下(1)-(3)中任一种中的应用：

(1)对鹅感染新型鹅星状病毒进行流行病学调查；

(2)对血液或血清制品中的新型鹅星状病毒污染进行高通量检测；

(3)精确检测新型鹅星状病毒拷贝数，明确鹅星状病毒的感染进程。

8.一种利用权利要求3-6任一项所述的荧光定量PCR检测试剂盒检测新型鹅星状病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

提取待测样品总RNA并反转录成cDNA，作为模板；构建荧光PCR反应体系进行扩增反应，收集待测样品荧光信号，对荧光信号进行数据处理，得到Ct值及扩增曲线，对待测样品进行定性和定量检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述荧光PCR反应体系为20μL，包括：TBGreen^TM Fast qPCR Mix 10μL、SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物各0.3μL、模板1μL、无菌去离子水8.4μL。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述扩增反应的条件为：95℃预变性30s；之后95℃ 5s、60℃ 30s，进行40个循环。