[发明专利]同时进行PGT-A和PGT-M的检测方法及其试剂盒在审
| 申请号： | 201910700323.4 | 申请日： | 2019-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN110283904A | 公开（公告）日： | 2019-09-27 |
| 发明（设计）人： | 段佳丽;郭文浒;郑邦烈;薛怡婷;陈浩 | 申请（专利权）人： | 阿吉安（福州）基因医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 福州市博深专利事务所(普通合伙) 35214 | 代理人： | 董晗 |
| 地址： | 350108 福建省福州市*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 扩增产物 试剂盒 限制性片段长度多态性分析 染色体非整倍体 单基因遗传病 生物检测技术 单体型分析 滋养层细胞 等位基因 检测试剂 紧密相连 连锁分析 全基因组 试管婴儿 致病基因 单基因 片段化 测序 家系 扩增 囊胚 脱扣 植入 疾病 应用 分析 | ||
1.同时进行PGT-A和PGT-M的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、获取囊胚滋养层细胞，进行单细胞全基因组扩增，得到扩增产物；
步骤2、根据单基因病患者的家系设计STR引物；
步骤3、取步骤1所得扩增产物进行二代测序；
取步骤1所得扩增产物，并使用步骤2所述的STR引物的外引物进行第一轮多重PCR反应；再将第一轮多重PCR反应所得产物作为模板，并使用步骤2所述的STR引物的内引物进行第二轮多重PCR反应，得到第二轮产物；
步骤4、稀释步骤3所得第二轮产物，取稀释后的第二轮产物加入内标标记后混匀，然后进行毛细管电泳；
取步骤3所得第二轮产物进行限制性内切酶酶切反应。
2.同时进行PGT-A和PGT-M的检测试剂盒，其特征在于，包括细胞裂解液、预扩增混合液、扩增混合液、末端修复反应液、末端修复酶、DNA连接酶缓冲液、DNA连接酶、接头、无酶无菌水、STR引物、10×PCR缓冲液、dNTP混合液、Taq聚合酶、内切酶反应液和限制性内切酶。
3.根据权利要求2所述的用于同时进行PGT-A和PGT-M的检测试剂盒，其特征在于，所述预扩增混合液由预扩增缓冲液和预扩增酶混合组成，所述预扩增缓冲液和预扩增酶的体积比为19:1。
4.根据权利要求2所述的同时进行PGT-A和PGT-M的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增混合液由扩增缓冲液和扩增酶混合而成，所述扩增缓冲液和扩增酶的体积比为29:1。
5.根据权利要求2所述的同时进行PGT-A和PGT-M的检测试剂盒，其特征在于，所述STR引物是针对单基因病患者的家系设计得到。
6.根据权利要求5所述的同时进行PGT-A和PGT-M的检测试剂盒，其特征在于，所述STR引物的工作浓度为10μM。
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