[发明专利]同时进行PGT-A和PGT-M的检测方法及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种同时进行PGT‑A和PGT‑M的检测方法及其试剂盒，属于生物检测技术领域，该检测方法通过获取囊胚滋养层细胞，进行单细胞全基因组扩增，得到扩增产物；根据单基因病患者的家系设计STR引物；取扩增产物进行二代测序；取扩增产物和STR引物进行STR连锁分析、限制性片段长度多态性分析和片段化分析。本发明还提供了同时进行PGT‑A和PGT‑M的检测试剂盒。该检测方法及其试剂盒，选择与疾病致病基因紧密相连的STR位点进行单体型分析，解决了传统方法中单细胞模板量有限限制、等位基因脱扣率高的问题，可应用于试管婴儿植入前染色体非整倍体检测和单基因遗传病检测，检测成本低，便于操作。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种同时进行PGT-A和PGT-M的检测方法及其试剂盒。

背景技术

根据中国人口协会、国家计生委发布的《中国不孕不育现状调研报告》显示，中国的不孕不育发病率在12.5-15％，患者人数超过4000万，平均每8对夫妇中就有1对存在不孕不育问题。二胎政策开放后，国内符合二孩标准的夫妻大约在9000万对，更使得高龄妇女在妊娠人群中的比例大幅度上升。年龄大于35岁的不孕妇女、反复自然流产、反复胚胎种植失败的患者面临着更加难以攻克的生育问题。

据统计，遗传病在活婴中的发病率为23-25‰，而我国每年将出生1647-1700万新生儿，这样，每年我国将增加38.5-42万遗传病患儿，对家庭和社会都将是一个沉重的精神和经济负担。年龄大于35岁的不孕妇女、反复自然流产、反复胚胎种植失败的患者的胚胎发生非整倍体的风险较高，遗传性疾病患儿及出生缺陷患儿的发生率亦更高，解决此类患者的生育问题，是生殖医生以及胚胎学家面临的巨大挑战。

植入前染色体非整倍体检测(Preimplantation Genetic Testing forAneuploidy,PGT-A)，利用分子生物学技术，在胚胎植入着床之前对早期胚胎进行23对染色体数目异常的检测，通过比对分析来检测胚胎是否有染色体及大片段的拷贝数异常。流行病学调查发现自然妊娠早产流产率约在15％左右，并且研究发现胚胎染色体异常率为46％左右，是导致自然流产的主要因素，在植入前对胚胎进行遗传学筛查临床意义重大。随着女性年龄增加，胚胎染色体异常的发生率会明显升高，PGT-A可提高优质胚胎的筛选率。

单基因遗传病，即人体因单个基因缺陷所引发的疾病，这些缺陷包括单个核苷酸的突变，片段缺失、置换引起的移码突变和序列重复等。这些缺陷既可来自父母，也可源于自身，并都有遗传给下一代的可能。单基因遗传病由于种类繁多，总的发病率高，已经对人类健康造成了较大的威胁。部分单基因遗传病往往致死、致残或致畸，并且缺乏有效的治疗手段，只能尽早通过遗传咨询、胚胎植入前诊断，尽早发现并进行干预。孕前筛选正常胚胎移植，防止遗传病患儿出生，降低单基因病的发病率。植入前单基因遗传病检测(Preimplantation Genetic Testing for Monogenic/Single Gene Defects，PGT-M)，是取胚胎的遗传物质进行分析，判断是否有异常，筛选健康的胚胎移植，防止遗传病传递的检测方法。

目前用于PGT-M的检测方法是聚合酶链反应技术，但这种方法存在面临污染和等位基因脱扣的问题，容易出现假阳性或假阴性的结果而导致误诊。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种快速且便利的、可解决单细胞模板等位基因脱扣率高的问题的同时进行PGT-A和PGT-M的检测试剂盒及其检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：同时进行PGT-A和PGT-M的检测方法，包括以下步骤：

步骤1、获取囊胚滋养层细胞，进行单细胞全基因组扩增，得到扩增产物；

步骤2、根据单基因病患者的家系设计STR引物；

步骤3、取步骤1所得扩增产物进行二代测序；