[发明专利]一种从贝类排泄物中提取贝类DNA的方法在审
| 申请号： | 201910700739.6 | 申请日： | 2019-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN110592071A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 董志国;张敏;茆双;段海宝;冯森磊;孙泽鹏;李雯倩;张冬冬 | 申请（专利权）人： | 江苏海洋大学;连云港众创水产养殖有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 11621 北京和联顺知识产权代理有限公司 | 代理人： | 闫超良 |
| 地址： | 222005 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 混匀 取上清液 水浴 排泄物 贝类DNA 贝类 无损伤 异丙醇沉淀 沉淀干燥 乙醇漂洗 蛋白酶K 饱和酚 氯仿 筛绢 匀浆 冲洗 沉淀 采集 刺激 检测 应用 | ||
1.一种从贝类排泄物中提取贝类DNA的方法，具体步骤如下：
(1)取贝类排泄物置于200目筛绢网上，用适量ddH2O缓慢冲洗排泄物，除去排泄物表面杂质；取约200mg排泄物于1.5mL离心管中，加入200μLddH2O，用吸管吹打成排泄物匀浆，800r/min离心3min，取上清液；
(2)加入400μL10％SDS和10μLProteinaseK，65℃水浴60min至完全消化，每隔10min混匀一次，后加入10μL20mg/mLRNase，37℃水浴10min，12000r/min离心3min，取上清液；
(3)加入等体积的冰冷饱和酚，上下颠倒混匀，室温静置5min，12000r/min离心12min，取上清液；加入等体积氯仿，上下颠倒混匀，12000r/min离心10min，取上清液；加入等体积异丙醇，颠倒8次充分混匀，室温放置3min，12000r/min离心5min，弃上清液；
(4)加入1mL70％的冰冷乙醇漂洗，12000r/min离心3min，弃上清液；重复漂洗一次，离心弃上清液；取沉淀室温干燥，加30μLTE Buffer溶解。
2.根据权利要求1所述从贝类排泄物中提取贝类DNA方法，其特征在于，步骤1)所述贝类排泄物是指贝类排出的0-5d(夏季)/0-10d(春、秋季)/0-25d(冬季)的排泄物；冲洗时必须用ddH2O缓慢冲洗排泄物表面，切勿破坏排泄物结构。
3.根据权利要求1或2所述从贝类排泄物中提取贝类DNA方法，其特征在于，所述贝类包括青蛤、文蛤、扇贝、牡蛎等海洋贝类。
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