[发明专利]一种从贝类排泄物中提取贝类DNA的方法

说明书

本发明公开一种从贝类排泄物中提取贝类DNA的方法，该提取方法为采集贝类排泄物置于筛绢网上，ddH₂O缓慢冲洗，加入ddH₂O，吹打成排泄物匀浆，离心取上清液；加入SDS、蛋白酶K，混匀后水浴；加入RNA酶，混匀后水浴，离心取上清液；加入冰冷饱和酚，混匀后水浴，离心取上清液；加入氯仿，混匀后水浴，离心取上清液；加入异丙醇沉淀DNA，混匀，离心，弃上清；加入乙醇漂洗沉淀DNA，混匀，离心，取沉淀干燥，即提取获得贝类DNA。本发明可应用于贝类DNA的无损伤提取，对贝类无刺激无损伤，操作简单，检测准确性高，宜于推广应用。

技术领域

本发明涉及一种DNA提取方法，具体地说，涉及一种从贝类排泄物中提取贝类DNA的方法。

背景技术

贝类养殖业在供应优质蛋白质、提高渔民收入、改善近海环境等方面发挥了重要的作用。与此同时贝类养殖也面临着资源衰竭的问题，越来越多的学者通过分子生物学技术获取贝类DNA并研究其遗传信息，用分子辅助育种的方法达到改善贝类品质，选育贝类抗逆新品的目的，解决贝类资源枯竭的问题。但是，传统的取样方法多集中于伤害性取样或非伤害性取样，如直接解剖、用扩口器开壳、壳上钻孔等，破坏了贝类内部组织结构的完整性，对贝类造成较强的机械损伤甚至致死，不利于贝类后期保种、遗传育种及贝类资源的保护尤其是对濒危珍稀贝类。因此，如何无损伤提取贝类DNA已经成为本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种从排泄物中提取贝类DNA的方法，以实现对贝类的无损DNA提取，本发明是这样实现的：

一种从排泄物中贝类DNA无损伤提取方法，其具体步骤如下：

1、采集贝类排泄物及前处理：

(1)先将贝类饥饿处理2天，使体内杂质完全排出。投喂食适量的饵料，待排便后，使用虹吸法从池底部收集粪便。

(2)将采集的粪便移至200目筛绢网上，用ddH₂O小心缓慢地冲洗排泄物表面，以去除表面杂质。取约200mg粪便移至1.5mL离心管，加入约200μL ddH₂O，用吸管吹打成排泄物匀浆，800r/min离心3min，取上清液。

2、DNA提取：

(1)向上清液中加入400μL 10％SDS和10μLProteinase K，65℃水浴60min至完全消化，每隔10min混匀一次，后加入10μL20mg/mLRNase，37℃水浴10min，12000r/min离心3min，取上清液；

(2)加入等体积的冰冷饱和酚，上下颠倒混匀，室温静置5min，12000r/min离心12min，取上清液；加入等体积氯仿，上下颠倒混匀，12000r/min离心10min，取上清液；加入等体积异丙醇，颠倒8次充分混匀，室温放置3min，12000r/min离心5min，弃上清液；

(3)加入1mL 70％的冰冷乙醇漂洗，12000r/min离心3min，弃上清液；重复漂洗一次，离心弃上清液；取沉淀室温干燥，加30μL TE Buffer溶解。

本发明中所述“贝类”是指包括青蛤、文蛤、扇贝、牡蛎等海洋贝类。

有益效果：本发明可应用于贝类DNA的无损伤提取，对贝类无刺激无损伤，操作简单，检测准确性高，宜于推广应用。

附图说明

图1为实施例1采用是本发明提供的方法提取DNA的电泳结果示意图；

图2为实施例2从青蛤粪便中所提取的青蛤DNA采用4对引物PCR扩增电泳检测结果示意图；

图3为实施例3不同浸泡时间和环境温度下青蛤粪便形态变化图；